| Bacterial Conjugation Protocol for Ruminant Mycoplasmas
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] In Mycoplasma agalactiae, two simultaneous processes of DNA transfer have been described that require direct cell-to-cell contact and are similar to conjugation. One involves the self-transmission of an integrative conjugative element (ICE) while the second concerns the horizontal transfer of large and small fragments of chromosomal DNA. Here, we describe an optimized conjugation protocol for the horizontal transfer of ICE or chromosomal DNA carrying antibiotic resistance markers (i.e., tetracycline, gentamicin, puromycin) from donor to recipient mycoplasma cells. Calculation of the ...
[摘要] [摘要]在无乳支原体中，已经描述了DNA转移的两个同时过程，它们需要直接的细胞间接触，并且类似于缀合。一种涉及整合共轭元件（ICE）的自我传递，而第二种涉及染色体DNA大小片段的水平转移。在这里，我们描述了一种优化的结合方案，用于从供体到受体支原体细胞水平转移带有抗生素抗性标记（即四环素，庆大霉素，嘌呤霉素）的ICE或染色体DNA 。详细介绍了共轭频率的计算，跨共轭物的选择和表征。该协议已与无乳分枝杆菌一起开发但已成功用于牛分枝杆菌，并可适应其他相关支原体物种。
[背景]共轭的，水平的DNA转移是微生物多样化的关键角色。通过促进细胞与细胞之间的紧密接触主动转移DNA （Lederberg和Tatum，1946），这种现象促进了从外部资源快速获取新性状。支原体（类柔膜）是无壁菌，其进化已经被认为是由基因损失仅减小驱动的基因组，并且其中水平基因转移（HGT ）被长期被认为是边缘。在过去的十年中，比较基因组学分析重新审视了这种范例，并显示出（i）在共享同一宿主的支原体物种之间发生了HGTs事件（Sirand-Pugnet et al。，2007），以及（ii）整合和共轭的存在元件（ICE中）中的大量测序支原体基因组（Calcutt等人，2002; Marenda等人，2006; Dordet-弗里索尼等人，2013;拖期等人，2015; Meygret ...
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| Zebrafish Bacterial Infection Assay to Study Host-Pathogen Interactions
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] The study of host-pathogen interactions has improved our understanding of both pathogenesis and the response of the host to infection, including both innate and adaptive responses. Neutrophils and macrophages represent the first line of innate host defense against any infection. The zebrafish is an ideal model to study the response of these cells to a variety of pathogens. Zebrafish possess both neutrophils and macrophages exhibiting similar defense mechanisms to their human counterparts. The transparency of zebrafish embryos greatly facilitates in vivo tracking of infection dynamics ...
[摘要]
[ 文摘动作 ] 宿主-病原体相互作用的研究已经提高了我们既发病机制和宿主对INFE响应的理解ction，包括先天性和适应性应答。中性粒细胞和巨噬细胞是抵抗任何感染的先天宿主防御的第一线。斑马鱼是研究这些细胞对多种病原体反应的理想模型。斑马鱼同时具有嗜中性粒细胞和巨噬细胞表现出荷兰国际集团类似的防御机制，它们人的相应。斑马鱼胚胎的透明性极大地促进了体内 使用标记的病原体以非侵入性的方式以高分辨率跟踪感染动态，同时还可以通过转基因方式标记免疫细胞，以进行更深入的分析。在这里，我们描述了一种方法，用于执行一个在斑马鱼中的细菌感染测定胚胎使用荧光标记的大肠杆菌细菌和演示感染动力学的监测和定量。值得注意的是，该程序有助于理解对驱动先天免疫应答至关重要的基因的功能作用。
[ 背景 ] 宿主-病原体相互作用的研究是重要的是了解疾病的发病机理，也为有效治疗药物的开发。需要确定宿主和病原体的多个方面，以确定宿主中的潜在危险因素和病原体中的关键毒力因素。先天性免疫是抵抗感染的第一道防线，它会引发一连串的反应，包括炎症，中和和适应性免疫系统各组分的募集（Akira et ...
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| Improved Oviduct Transfer Surgery for Genetically Modified Rat Production
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Rat embryo transfer surgeries are becoming more common with targeted nucleases increasing the demand for rat models. This protocol details pre-surgical preparation, improved surgical techniques for placing embryos into the oviduct, and post-surgical care of rats to parturition. Direct application of mouse oviduct transfer protocols results in limited success in the rat. By combining techniques from several widely used protocols in the field, increased yield of live pups born to healthy dams is possible. This protocol is distinct from previously published protocols by the use of a modified ...
[摘要] 大鼠胚胎移植手术正变得越来越普遍，靶向核酸酶增加对大鼠模型的需求。 该协议详细介绍了手术前准备，将胚胎置入输卵管的改进的外科技术以及大鼠分娩后的手术后护理。 直接应用小鼠输卵管转移方案在大鼠中的成功有限。 通过组合来自现场广泛使用的几种方案的技术，可以提高健康水坝出生的活的小狗的产量。 该方案与以前公开的方案不同，通过使用改进的麻醉方案（Smith等人，2004），使用止痛剂，添加腹膜缝线（Filipiak和Saunders，2006），切割位置和每只动物的转移数 （Krinke等，2000）。
【背景】在显微注射和胚胎移植手术后可靠地生产健康小狗的能力对于模型创建至关重要，特别是创建多个创始动物的可能性增加，对观察到的表型有信心。因此，即使使用不同浓度的注射液，出生率相对于报告的比例较低，系统地对现有的小鼠胚胎移植方案进行了修改，以更好地适应大鼠。
多个出版物描述了将胚胎转移到两侧子宫的两个角的输卵管;然而，这增加了动物在麻醉下的时间长度，并且需要中线切口并穿过腹膜腔以到达侧生殖道，或者产生两个单独的切口（Krinke等人，2000）。这些选择不太理想，因为这两个选项都会增加动物的压力，从而增加妊娠中止的可能性。通过在术前和术后创建单侧切口并施用镇痛，动物的压力被最小化（Smith等人，2004）。使用异氟烷可注射麻醉剂可以最大程度地降低毒性风险（如三溴乙醇所见），IP注射损伤和重复给药，所有这些都与啮齿动物手术后的死亡率相关（Bernal ...
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