| Lentiviral Barcode Labeling and Transplantation of Fetal Liver Hematopoietic Stem and Progenitor Cells
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Cellular barcoding enables the dissection of clonal dynamics in heterogeneous cell populations through single cell lineage tracing. The labeling of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with unique and heritable DNA barcodes, makes it possible to resolve donor cell heterogeneity in terms of differentiation potential and lineage bias at the single cell level, through subsequent transplantation and high-throughput sequencing. Furthermore, cellular barcoding allows for bona fide hematopoietic stem cells (HSCs) to be defined based on functional rather than immunophenotypic parameters. ...
[摘要] 细胞条形码可以通过单细胞谱系追踪来分离异种细胞群体中的克隆动力学。通过独特和可遗传的DNA条形码对造血干细胞和祖细胞（HSPC）进行标记，可以通过随后的移植和高通量测序，在单细胞水平上分化供体细胞异质性，分化潜力和谱系偏倚。此外，细胞条形码可以根据功能而不是免疫表型参数定义真正的造血干细胞（HSC）。
＆nbsp;该协议描述了慢病毒细胞条形码的工作流程，追踪1450天后（dpc）胎肝（FL）Lineage-Sca+ cKit + （LSK）HSPC经过长期重建（图1）（Kristiansen等人，2016），但可以适应于选择的细胞类型或时间框架。
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图1.实验工作流程摘要（Naik 等人，2013）
最初建立了细胞条形码技术来解决在体内移植造血细胞后的单细胞动力学，并且近年来在移植中对血细胞群体中功能异质性的认识有显着贡献（Schepers ，2008; Gerrits等人，2010; Lu等人，2011; Naik等人 ，2013; Verovskaya等人，2013; ...
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| Construction of NSG-CTL Mice
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Author:
Date:
2013-02-20
[Abstract] The NSG-CTL mouse model is a humanized mouse model that allows the generation of peripheral human immune responses, particularly CD8+ Cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses, and serves as an effective model for studying gene-based therapies. Natural antigen-specific T cell responses in humanized mice are relatively weak and this model was developed to boost antigen specific responses, in this case to HIV, to more closely assess these responses in vivo. We have engineered human T cells that develop in these mice to express a molecularly cloned T cell receptor (TCR) specific to HIV. ...
[摘要] NSG-CTL小鼠模型是允许产生外周人免疫应答，特别是CD8 +细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答的人源化小鼠模型，并且作为研究基于基因的治疗的有效模型。人源化小鼠中天然抗原特异性T细胞应答相对较弱，并且开发这种模型以加强抗原特异性应答，在这种情况下是HIV，以更密切地评估这些体内的反应。我们已经设计在这些小鼠中发展的人T细胞，以表达对HIV特异性的分子克隆的T细胞受体（TCR）。克隆的TCR与任何抗原理论上可用于研究体内的特异性应答，只要所操作的组织是相同的人白细胞抗原（HLA）类型。具有抗原特异性TCR的造血干细胞的修饰允许在这些小鼠的外周中形成成熟的，功能性T细胞，其在正常发育过程之后对该抗原是特异性的。该模型最近已经发表（Kitchen等人，2012），这是Melkus等人发表的人源化小鼠BLT模型的主要修饰。 （2006）。我们使用非肥胖糖尿病（NOD） - 严重联合免疫缺陷（SCID），常见的γ链敲除（γc -/- ）或NSG小鼠，并植入胎儿胸腺片与基因修饰的CD34 +造血干细胞从胎儿肝脏分离，在肾囊下发育成功能性胸腺植入物。同时，我们通过全身照射消耗小鼠的骨髓，并静脉内注射更多的修饰的HSC用于在小鼠骨髓中造血植入。该协议概述了处理胎儿组织的过程，使用表达分子克隆的T细胞受体的慢病毒载体基因转导HSC，并进行囊下肾移植手术。
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