| GFP-Grb2 Translocation Assay Using High-content Imaging to Screen for Modulators of EGFR-signaling
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] High-content screening is a useful tool to understand complex cellular processes and to identify genes, proteins or small molecule compounds that modulate such pathways. High-content assays monitor the function of a protein or pathway by visualizing a change in an image-based readout, such as a change in the localization of a reporter protein. Examples of this can be the translocation of a fluorescently tagged protein from the cytoplasm to the nucleus or to the plasma membrane. One protein that is known to undergo such translocation is the Growth Factor Receptor-bound protein 2 (GRB2) that is ...
[摘要] 高含量筛选是了解复杂细胞过程和鉴定调节这种途径的基因，蛋白质或小分子化合物的有用工具。高含量测定法通过显现基于图像的读数的变化来监测蛋白质或途径的功能，例如报告蛋白的定位的变化。其实例可以是将荧光标记的蛋白质从细胞质转移到细胞核或质膜。已知发生这种易位的一种蛋白质是生长因子受体结合蛋白2（GRB2），其在刺激生长因子受体并且随后经历内化后被招募到质膜。我们以前用GFP标记的Grb2来鉴定涉及EGFR信号的基因（Petschnigg等，2017）。最终，该测定可以适应于cDNA表达克隆（Freeman等人，2012），并且可用于早期药物发现以鉴定调节或抑制EGFR信号传导和内化的化合物（Antczak和Djaballah，2016）。
【背景】生长因子受体的信号转导对细胞维持正常功能至关重要，因此需要严格控制。生长因子受体的信号转导通过外部配体（例如，表皮生长因子，EGF）与跨膜受体（例如表皮生长因子受体（EGFR））和下游信号级联的活化（Yao等人，2015 ）。 EGFR-信号传导的关键调节因子是生长因子受体结合蛋白2（Grb2），其由两个SH3结构域的内部SH2（Src同源性2）结构域组成。 Grb2通过其SH2结构域结合磷酸化酪氨酸残基上的活化生长因子受体，从而将受体活化与SOS-Ras-MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）信号级联偶联。 ...
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| Virtual Screening of Transmembrane Serine Protease Inhibitors
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] The human family of type II transmembrane serine proteases includes 17 members. The defining features of these proteases are an N-terminal transmembrane domain and a C-terminal serine protease of the chymotrypsin (S1) fold, separated from each other by a variable stem region. Recently accumulated evidence suggests a critical role for these proteases in development of cancer and metastatic capacity. Both the cancer relevance and the accessibility of the extracellularly oriented catalytic domain for therapeutic and imaging agents have fueled drug discovery interest in the type II class of ...
[摘要] II型跨膜丝氨酸蛋白酶的人类家族包括17个成员。这些蛋白酶的定义特征是糜蛋白酶（S1）折叠的N末端跨膜结构域和C末端丝氨酸蛋白酶，通过可变的茎区彼此分离。最近积累的证据表明这些蛋白酶在癌症和转移能力的发展中起关键作用。肿瘤相关性和用于治疗和成像剂的细胞外定向催化结构域的可及性促使药物发现对II型跨膜丝氨酸蛋白酶的兴趣。通常，初始命中发现过程旨在识别在药物靶标上具有可验证活性的分子，并具有足够的药物样特征。我们在这里提出了用于跨膜丝氨酸蛋白酶hepinin的候选配体的基于结构的虚拟筛选方案。该方法描述了使用三磷酸腺嘌呤的催化位点的3D结构与ZINC进行分子对接，ZINC是具有 3000万种可购买化合物的分子数据库。小的候选子集经过实验测试，具有可证实的命中，为进一步的铅开发提供了有用的配体结构线索。
受控的蛋白水解活性在细胞过程和信号传导中发挥重要作用，正如所有生物体中蛋白酶的存在所证明的，包括病毒，原核生物和真核生物。不足为奇的是，异常调节的蛋白酶活性是造成人类病态，如心血管疾病和炎症疾病，骨质疏松症，神经系统疾病和癌症的多种因素（Turk，2006; ...
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