| Osteoblast Sorting and Intracellular Staining of CXCL12
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Osteoblasts are bone marrow endosteum-lining niche cells playing important roles in the regulation of hematopoietic stem cells by secreting factors and cell adhesion molecules. Characterization of primary osteoblasts has been achieved through culture of outgrowth of collagenase treated bone. Immunophenotyping and flow-based analysis of long bone osteoblasts offer a simplified and rapid approach to characterize osteoblasts. We describe a modified procedure of isolating mouse bone marrow osteoblastic cells based on cell surface immunophenotyping. The chemokine CXCL12 (also known as ...
[摘要] 成骨细胞是通过分泌因子和细胞粘附分子在调节造血干细胞中发挥重要作用的骨髓内皮细胞生态位细胞。 通过培养胶原酶处理的骨骼的生长已经实现了原代成骨细胞的表征。 长骨成骨细胞的免疫分型和基于流动的分析为表征成骨细胞提供了简化和快速的方法。 我们描述了基于细胞表面免疫分型的分离小鼠骨髓成骨细胞的修改过程。 趋化因子CXCL12（也称为基质衍生因子SDF-1）与其受体CXCR4一起由成骨细胞和骨髓基质细胞表达。 CXCL12-CXCR4轴对于造血干细胞滞留于其生态位（Sugiyama等，2006）和支持白血病启动细胞活性（Pitt等，2015年）。 这里我们描述CXCL12细胞内染色的过程。
【背景】骨髓龛是一种高度组织化的微环境，基质细胞参与与调节HSC静止，分化和动员的造血干细胞（HSC）的直接细胞 - 细胞相互作用（Anthony and Link，2014; Mendelson and Frenette，2014; Morrison和斯卡登，2014年）。 HSC细胞生态位中的多种细胞类型可能以不同的但可能重叠的方式贡献于小生境功能支持。这些细胞包括但不限于成骨细胞，破骨细胞，富含CXCL12的网状（CAR）细胞，Nestin +基质细胞，瘦素受体+（LepR + ...
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| Isolation, Culturing, and Differentiation of Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Myogenesis is a multi-step process that leads to the formation of skeletal muscle during embryonic development and repair of injured myofibers. In this process, myoblasts are the main effector cell type which fuse with each other or to injured myofibers leading to the formation of new myofibers or regeneration of skeletal muscle in adults. Many steps of myogenesis can be recapitulated through in vitro differentiation of myoblasts into myotubes. Most laboratories use immortalized myogenic cells lines that also differentiate into myotubes. Although these cell lines have been found ...
[摘要] 造血是一种多步骤过程，导致在损伤的肌纤维的胚胎发育和修复期间骨骼肌的形成。在这个过程中，成肌细胞是主要的效应细胞类型，彼此融合或损伤肌纤维，导致新成肌纤维的形成或成年人骨骼肌的再生。通过体外成骨细胞分化成肌管可以概括出许多发生肌肉发育的步骤。大多数实验室使用也分化成肌管的永生化肌原细胞系。虽然已经发现这些细胞系对于描绘造血的调节机制非常有用，但是它们通常依赖于细胞的来源和培养条件而显示出很大的变异性。原代成肌细胞被认为是体外研究肌生成的最生理学相关模型。然而，由于成体骨骼肌的丰度低，原代成肌细胞的分离在技术上是有挑战性的。在本文中，我们描述了一种用于从小鼠的成年骨骼肌分离原代成肌细胞的改进方案。我们还描述了其培养和分化成肌管的方法。
背景 造血是一个复杂而高度协调的过程，其涉及多潜能中胚层细胞的测定，以产生成肌细胞，成肌细胞从细胞周期中排出，以及它们最终分化为骨骼肌纤维。 Myogen-5，MyoD，myogenin和MRF4的基因螺旋 - 环 - 螺旋转录因子的一组基因调控因子（MRFs）的顺序表达调控。 Myf-5和MyoD是成肌细胞形成，增殖和存活所需的主要MRFs，而其他MRF（如肌细胞生成素和MRF-4）在肌发生过程中起作用迟发，激活收缩蛋白和其他结构和代谢蛋白的基因表达（白金汉，2003; ...
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