| Assessing in vitro and in vivo Trogocytosis By Murine CD4+ T cells
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Recognition of antigens by lymphocytes (B, T, and NK) on the surface of an antigen-presenting cell (APC) leads to lymphocyte activation and the formation of an immunological synapse between the lymphocyte and the APC. At the immunological synapse APC membrane and associated membrane proteins can be transferred to the lymphocyte in a process called trogocytosis. The detection of trogocytosed molecules provides insights to the activation state, antigen specificity, and effector functions and differentiation of the lymphocytes. Here we outline our protocol for identifying trogocytosis-positive ...
[摘要] [摘要 ] 抗原呈递细胞（APC）表面的淋巴细胞（B，T和NK）识别抗原会导致淋巴细胞活化并在淋巴细胞和APC之间形成免疫突触。在免疫突触处APC膜和相关的膜蛋白可以转移调用Trogocytosis到淋巴细胞的过程。检测Trogocytosed分子提供见解的激活状态，抗原特异性和效应器功能和差异的淋巴细胞。这里我们列出了我们的协议，用于识别Trogocytosis CD4阳性Tasu 性T细胞在体外和体内。体外，抗原呈递细胞是表面 生物素化并预装磁性聚苯乙烯珠，然后与体外活化的CD4 + T细胞胚细胞（90分钟）或幼稚T细胞（3-24小时）短时间孵育。阳性（trog + ）细胞可通过链霉亲和素染色来筛选经生物素化的经转钙蛋白的APC膜蛋白，然后立即或在随后的孵育后通过流式细胞仪分析其激活表型，效应子功能和效应子的分化，例如，可以鉴定出嗜光细胞的阳性细胞。以前的研究已经描述了分析T细胞嗜光性的方法，以鉴定抗原特异性细胞或被细胞识别的抗原表位。使用当前方案，嗜光性对单个T细胞的影响或能力trog + T细胞调节其他免疫细胞的激活和功能的能力可在一个扩展范围内进行评估 ed时间段。
[背景 ] Trogocytosis是质膜和膜相关分子的细胞间转移。这种现象已在免疫细胞相互作用的分析中得到了广泛研究，并已观察到包括向CD4 +的转移（Wetzel 等，2005； ...
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| Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC)
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are adult stem cells which have been shown to improve survival, enhance bacterial clearance and alleviate inflammation in pre-clinical models of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and sepsis. These diseases are characterised by uncontrolled inflammation often underpinned by bacterial infection. The mechanisms of MSC immunomodulatory effects are not fully understood yet. We sought to investigate MSC cell contact-dependent communication with alveolar macrophages (AM), professional phagocytes which play an important role in the lung inflammatory ...
[摘要] 间充质干/基质细胞（MSC）是成年干细胞，已被证明可以改善急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和败血症临床前模型中的存活，增强细菌清除和减轻炎症。这些疾病的特征在于通常受细菌感染支持的不受控制的炎症。 MSC免疫调节作用的机制尚未完全了解。我们试图研究与肺泡巨噬细胞（AM），在肺炎症反应和抗菌防御中起重要作用的专业吞噬细胞的MSC细胞接触依赖性通信。通过使用基本的直接共培养系统，共聚焦显微镜和流式细胞术，我们通过隧道纳米管（TNT）显现并有效量化了MSC线粒体转移到AM。为了模拟人类AM，在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）存在下，从人供体血液中分离原代单核细胞并分化成巨噬细胞（单核细胞衍生的巨噬细胞，MDM），从而允许适应AM样表型（de Almeida等人，2000; Guilliams等人，2013）。人骨髓衍生的MSC用线粒体特异性荧光染色标记，广泛洗涤，以1:20（MSC / ...
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