| Quantifying the Capacity of Phloem Loading in Leaf Disks with [14C]Sucrose
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Phloem loading and transport of photoassimilate from photoautotrophic source leaves to heterotrophic sink organs are essential physiological processes that help the disparate organs of a plant function as a single, unified organism. We present three protocols we routinely use in combination with each other to assess (1) the relative rates of sucrose (Suc) loading into the phloem vascular system of mature leaves (this protocol), (2) the relative rates of carbon loading and transport through the phloem (Yadav et al., 2017a), and (3) the relative rates of carbon unloading into ...
[摘要] 来自光合自养源的光合同化物的韧皮部装载和运输到异养宿主器官是必不可少的生理过程，其帮助植物的不同器官作为单一的统一生物体起作用。我们提出了三种方案，我们经常使用相互组合，以评估（1）蔗糖（Suc）加载到成熟叶片的韧皮部血管系统（本协议）的相对比率，（2）碳负荷和运输通过韧皮部（Yadav et al。，2017a），和（3）在长距离运输后碳卸载到异养汇器官特别是根中的相对速率（Yadav等人， / em>。，2017b）。我们建议，在实验和对照植物上进行所有三种方案提供了全植物碳分配的可靠比较，并且将与单独进行的单个方案相关联的歧义降至最低（Dasgupta等人，2014; Khadilkar 。，2016）。在该方案中，从成熟莲座叶中分离的拟南芥叶片用含有[14 C] Suc的缓冲溶液浸润。 Suc转运蛋白（SUCs或SUTs）将Suc载入韧皮部，并将多余的，卸载在叶片中的Suc洗掉。通过冻干叶盘的放射自显影显示标记的Suc加载到静脉中，并通过闪烁计数进行定量。结果表示为每单位叶盘鲜重或面积的每分钟崩解。
【背景】光合同化物从源头到宿主器官的运输对于整个植物的正常生长和维持至关重要。叶片中的韧皮部负载是将在叶肉细胞中合成的光合同化物递送至韧皮部脉管系统的伴生细胞（CC）和筛分元素（SE）。三种不同的加载机制被认可。其中两个消耗能量在CC和SEs中累积高浓度的糖，并在源叶韧皮部产生高静水压力。第一种是外源韧皮部装载，其中将Suc（和/或一些物种中的糖醇）穿过质膜从细胞壁空间（即，质外体）装载进入CC中的CC质子动力的牺牲（Giaquinta，1983）。第二种是聚合物捕获，其中Suc通过特化的胞间连丝（Botmodesmata）扩散到韧皮部，并转化为太大而不能扩散回来的寡糖（Turgeon，1996）。第三种机制是被动加载，其中叶肉细胞中的溶质浓度最高，胞间连丝为被动移入CC和SE提供了一个开放的途径（Rennie和Turgeon，2009）。 ...
|
|
|
| Preparation, Stimulation and Other Uses of Adult Rat Brain Synaptosomes
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] In this paper, our protocol for preparation of brain synaptosomes is described. Synaptosomes are a valuable model system for analysis of structural components of the synapse as well as for investigation of synaptic function. Synaptosomal preparations are necessary for understanding molecular changes at synapses where critical post-translational modifications of synaptic proteins may occur. Not only are synaptosomes rich in synaptic proteins, but they can be used for analyzing uptake of neurotransmitters into synaptic vesicles and for analysis of the involvement of neurotransmitter synthesis ...
[摘要] 在这篇论文中，我们描述了制备脑突触体的方案。突触体是用于分析突触的结构组分以及用于调查突触功能的有价值的模型系统。突触体制备对于理解可能发生突触蛋白的关键翻译后修饰的突触处的分子变化是必需的。突触小体不仅含有丰富的突触蛋白，还可用于分析神经递质向突触小泡的摄取和神经递质合成和释放的参与分析。可以用增加的钙内流刺激突触体释放神经递质。突触体制剂已被用于表征钙依赖性磷酸化和GABA合成酶GAD65（分子量为65kDa的L-谷氨酸脱羧酶）的活化。通过检查从突触体制剂获得的突触小泡膜上的蛋白质复合物，可以表征GAD65在GABA囊泡释放的偶联合成和囊泡摄取中的作用，这最终导致GABA囊泡释放GABA能神经传递的微调方法。
【背景】突触体制备方法在40多年前在神经科学研究实验室中建立，并且在涉及神经递质释放相关的细胞外钾升高以及对细胞内钙增加的应答方面具有极大的价值。除了阐明神经递质释放的过程之外，突触体制剂已经成为突触囊泡的有价值的来源。关于突触小泡的研究已经被用于表征参与偶联的神经递质合成和囊泡释放的蛋白质组分。突触体制剂作为突触囊泡分离的中间体也是非常有价值的，然后根据位于包含神经递质合成酶的囊泡膜上的蛋白质复合物进行分析。在这方面关键的意义在于包括CSP（胱氨酸 - ...
|
|
|
| Isolation of Cytosol, Microsome, Free Polysomes (FPs) and Membrane-bound Polysomes (MBPs) from Arabidopsis Seedlings
|
|
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The plant endomembrane system plays vital roles for synthesis, modification and secretion of proteins and lipids. From the classic view, only mRNAs encoding secreted proteins could be targeted to the endoplasmic reticulum (ER) for translation via a co-translational translocation manner, however, recently this model has been challenged by accumulative evidence that lots of cytosolic mRNAs could also associate with ER, and that some categories of small RNAs are enriched on ER. These results suggested unrevealed functions of ER beyond our current knowledge. The large scale identification of RNAs ...
[摘要] 植物内膜系统对蛋白质和脂质的合成，修饰和分泌起着至关重要的作用。 从经典观点来看，只有编码分泌蛋白质的mRNA才能通过协同翻译方式靶向内质网（ER）进行翻译，然而最近，这一模型已经被大量的细胞溶质mRNA也可能与 ER，并且一些类别的小RNA在ER上富集。 这些结果表明ER的功能超出了目前的知识。 在微粒体上大规模鉴定RNA和蛋白质对于显示ER功能至关重要，研究将由下一代测序技术提升。 该协议提供了从植物组织中分离细胞质，微粒体，游离多聚体（FP）和膜结合多聚体（MBP）的技术工作流程。 分离的级分适用于mRNA，小RNA和蛋白质的基因组广谱分析。
【背景】植物内膜系统对于细胞壁形成，脂质生物合成，蛋白质合成，修饰，折叠和贩运非常重要。根据共翻译易位模型，分泌蛋白N末端的信号肽由细胞溶质多核糖体合成，然后由ER上的信号识别粒子识别，其余蛋白质部分随后在ER上合成。根据该模型，只有编码分泌蛋白的mRNA可以被带到ER进行翻译（Peter和Johnson，1994）。然而，从哺乳动物和植物细胞ER（Lerner等人，2003; de ...
|
|
|