| Modeling NOTCH1 driven T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Mice
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological malignancy that arises from transformation of T-cell primed hematopoietic progenitors. Although T-ALL is a heterogenous and molecularly complex disease, more than 65% of T-ALL patients carry activating mutations in the NOTCH1 gene. The majority of T-ALL–associated NOTCH1 mutations either disrupt the negative regulatory region, allowing signal activation in the absence of ligand binding, or result in truncation of the C-terminal PEST domain involved in the termination of NOTCH1 signaling by ...
[摘要] [摘要 ] T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）是一种侵袭性血液恶性肿瘤，其起源于T细胞引发的造血祖细胞的转化。尽管T-ALL是一种异质且分子复杂的疾病，但超过65％的T-ALL患者在NOTCH1 基因中带有激活突变。大多数与T-ALL相关的NOTCH1 突变要么破坏负调控区，允许在没有配体结合的情况下激活信号，要么导致蛋白酶体降解终止NOTCH1信号终止所涉及的C末端PEST域被截短。迄今为止，逆转录病毒转导模型在很大程度上依赖于侵袭性截短的变种的过度表达。 NOTCH1 （例如ICN1或ΔE-NOTCH1）可导致信号传导的超生理水平，并且在人类T-ALL中很少见。当前方案描述了小鼠骨髓分离，造血干细胞和祖细胞（HSC）富集，然后逆转录病毒转导的致癌突变体形式的NOTCH1受体（NOTCH1-L1601P-ΔP）的方法，该方法与获功能突变最常见于患者样品中。组成型活性NOTCH1的这种强制表达的标志是胸腺外未成熟T细胞发育的瞬时波，此波在致癌性转化为T-ALL之前。此外，该方法通过允许白血病细胞与微环境之间的串扰来模拟体内白血病的转化和进展，这是基于细胞系的体外研究无法解释的一个方面。因此，HSC转导和移植模型更真实地概括了人类疾病的发展，为进一步的体内和离体功能研究提供了高度全面和通用的工具。
[背景 ] ...
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| Isolation, Purification and Characterization of Exosomes from Fibroblast Cultures of Skeletal Muscle
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] Exosomes are dynamic nanovesicles secreted by virtually all cells and are present in all biological fluids. Given their highly heterogeneous content exosomes have been implicated in many physiological and pathological processes that they exert by influencing cell-cell and cell-ECM communication. In recent years an increasing number of methods have been established for the purification and characterization of exosomes. These include ultracentrifugation, ultrafiltration, size exclusion chromatography, immune capture and precipitation using a proprietary polymer. Here, we provide a protocol ...
[摘要] [摘要 ] 外来体是几乎所有细胞分泌的动态纳米囊泡，并存在于所有生物体液中。鉴于它们的异质含量很高，外泌体已牵涉到它们通过影响细胞-细胞和细胞-ECM通讯而发挥的许多生理和病理过程。近年来，已经建立了越来越多的方法外泌体的纯化和表征。其中包括超速离心，超滤，尺寸排阻色谱，免疫捕获和使用专有聚合物的沉淀。在这里，我们提供了基于差分超速离心和蔗糖密度梯度的协议，该协议专门用于从成年小鼠骨骼肌衍生的原代成纤维细胞培养物中分离粗制和超纯外泌体。可以对该协议进行修改和修改，以从各种组织和体液中分离和表征外泌体。
背景 ] ë xosomes是单膜，异质纳米囊泡直径范围从30至150nm，secre 由所有细胞和存在于几乎所有的体液泰德。外泌体中存在的可溶性和膜大分子，mRNA，microRNA的光谱取决于代谢状态以及分泌这些纳米囊泡的细胞的发育起源。由于它们的货物组成，外泌体可以启动接收细胞中的信号传导途径，并参与了发育，免疫和正常组织生理的维持。在神经退行性疾病，纤维化和癌症等疾病条件下，它们被证明可以触发和传播病理刺激（Rackov 等，2018; Gurunathan 等，2019; van de Vlekkert 等，2019）。在这里，我们描述了从成年小鼠腓肠肌（GA）肌肉建立的成纤维细胞培养物中纯化外泌体的方案（van de Vlekkert ...
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| Sleeping Beauty Transposon-based System for Rapid Generation of HBV-replicating Stable Cell Lines
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] The stable HBV-transfected cell lines, which based on stable integration of replication-competent HBV genome into hepatic cells, are widely used in basic research and antiviral drug evaluation against HBV. However, previous reported strategies to generate HBV-replicating cell lines, which primarily rely on random integration of exogenous DNA by plasmid transfection, are inefficient and time-consuming. We newly developed an all-in-one Sleeping Beauty transposon system (denoted pTSMP-HBV vector) for robust generation of stable HBV-replicating cell lines of different genotype. The pTSMP-HBV ...
[摘要] 稳定的HBV转染细胞系基于将复制能力的HBV基因组稳定整合到肝细胞中，广泛用于基础研究和针对HBV的抗病毒药物评估。然而，先前报道的产生HBV复制细胞系的策略（其主要依赖于通过质粒转染的外源DNA的随机整合）是低效且耗时的。我们新开发了一体化睡眠美容转座子系统（表示为pTSMP-HBV载体），用于稳定产生不同基因型的稳定HBV复制细胞系。 pTSMP-HBV载体含有HBV1.3拷贝基因组和双重选择标记（mCherry和嘌呤霉素抗性基因），允许通过红色荧光激活细胞分选和嘌呤霉素抗生素选择快速富集稳定转染的细胞。在该方案中，我们描述了构建HBV复制稳定细胞和系统评估这些细胞的HBV复制和病毒蛋白表达谱的详细程序。
【背景】慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染目前是一个主要的公共卫生负担，影响全球超过2.4亿人（Witt-Kehati et al。，2016）。慢性HBV患者患慢性活动性肝炎，肝硬化或原发性肝细胞癌（HCC）的风险升高（Schweitzer et al。，2015）。目前用干扰素-α或核苷类似物治疗并不能根除病毒，它们对清除乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的作用有限（Lucifora和Protzer，2016; Soriano et al。，2017） 。因此，迫切需要开发新的抗病毒抑制剂（Nassal，2015）。
用于评估新药抗HBV活性的细胞培养模型是新药开发的重要工具。稳定的HBV复制细胞系，携带复制能力的HBV基因组稳定整合到人肝癌细胞系（Huh7和/或HepG2）的基因组中，被广泛用于评估抗病毒药物的作用（Witt-Kehati ...
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