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Sucrose

公司名称: Fisher Scientific
产品编号: S5-3
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Preparation of HeLa Total Membranes and Assay of Lipid-inhibition of Serine Palmitoyltransferase Activity
Author:
Date:
2020-06-20
[Abstract]  Serine palmitoyltranferase (SPT) is a pyridoxal 5′ phosphate (PLP)-dependent enzyme that catalyzes the first and rate-limiting step of de novo synthesis of sphingolipids. SPT activity is homeostatically regulated in response to increased levels of sphingolipids. This homeostatic regulation of SPT is mediated through small ER membrane proteins termed the ORMDLs. Here we describe a procedure to assay ORMDL dependent lipid inhibition of SPT activity. The assay of SPT activity using radiolabeled L-serine was developed from the procedure established by the Hornemann laboratory. The ... [摘要]  [摘要] 丝氨酸Palmitoyltranferase (SPT)是吡哆醛5 ' 磷酸(PLP)依赖酶催化第一和限速步骤中从头合成鞘脂。SPT活动是Homeostatically调控响应水平的提高鞘脂。这SPT的稳态调节是通过小ER膜蛋白介导称为ORMDLs。在这里,我们描述了一种方法用放射性标记的L-丝氨酸以测定SPT活性的SPT活性。测定的ORMDL依赖性抑制脂质从由规定的程序被开发Hornemann 实验室。 SPT的活性也可以使用氘化的L-丝氨酸进行测定,但需要进行质谱分析,这会耗费金钱,时间和仪器。可以在细胞和无细胞系统中研究ORMDL依赖性脂质对SPT活性的抑制作用。在这里,我们提供了详细的协议来测量存在短链(C8-神经酰胺)或长链神经酰胺(C24-神经酰胺)时SPT活性。该协议的最大优势之一我们通过在HeLa细胞膜中提供外源鞘氨醇和24:1酰基辅酶A通过内源性神经酰胺合酶生成长链神经酰胺来实现这一目标。需要精密的仪器。

[背景 ] 丝氨酸palmit oyltranferase (SPT)是一种多亚基酶是在真核生物和原核生物一些广泛表达(花田等人,1997; Ikushiro 。等人,2001; Hornemann 等人,2007).The ...

Assay to Measure Interactions between Purified Drp1 and Synthetic Liposomes
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  A mitochondrion is a dynamic intracellular organelle that actively divides and fuses to control its size, number and shape in cells. A regulated balance between mitochondrial division and fusion is fundamental to the function, distribution and turnover of mitochondria (Roy et al., 2015). Mitochondrial division is mediated by dynamin-related protein 1 (Drp1), a mechano-chemical GTPase that constricts mitochondrial membranes (Tamura et al., 2011). Mitochondrial membrane lipids such as phosphatidic acid and cardiolipin bind Drp1, and Drp1-phospholipid interactions provide key ... [摘要]  线粒体是一种动态的细胞内细胞器,主动分裂和融合以控制细胞的大小,数量和形状。线粒体分裂和融合之间的调节平衡是线粒体功能,分布和周转的基础(Roy等,2015)。线粒体分化是由动力蛋白相关蛋白1(Drp1)介导的,其是限制线粒体膜的机械化学GTP酶(Tamura等人,2011)。线粒体膜脂质如磷脂酸和心磷脂结合Drp1,并且Drp1磷脂相互作用提供线粒体分裂的关键调控机制(Montessuit等人,2010; Bustillo-Zabalbeitia等人2014年; Macdonald等人,2014年; Stepanyants等人,2015; Adachi等人,2016)。在这里,我们描述了使用纯化的重组Drp1和具有定义的一组磷脂的合成脂质体定量测量Drp1与脂质的相互作用的生物化学实验。该测定使得可以定义蛋白质 - 脂质相互作用的特异性以及头基和酰基链的作用。

背景 蛋白质和膜脂质的相互作用对于细胞如细胞器分裂中生物膜的重塑至关重要。在线粒体分裂中,Drp1限制线粒体膜并驱动该膜重塑过程。我们最近显示,信号磷脂,磷脂酸与Drp1相互作用,并通过限制线粒体上的组装分裂机制(Adachi等人,2016)产生启动步骤。 Drp1识别磷脂酸的头基和酰基链。为了分析Drp1-磷脂酸结合,我们建立了几种蛋白质 - ...

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