| Immunoprecipitation of Tri-methylated Capped RNA
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Cellular quiescence (also known as G0 arrest) is characterized by reduced DNA replication, increased autophagy, and increased expression of cyclin-dependent kinase p27Kip1. Quiescence is essential for wound healing, organ regeneration, and preventing neoplasia. Previous findings indicate that microRNAs (miRNAs) play an important role in regulating cellular quiescence. Our recent publication demonstrated the existence of an alternative miRNA biogenesis pathway in primary human foreskin fibroblast (HFF) cells during quiescence. Indeed, we have identified a group of ...
[摘要] 蜂窝静止（因此已知为G <子> 0 骤停）是由降低的DNA复制，增加自噬表征，并且增加的细胞周期蛋白依赖性激酶p27蛋白上标kip1 表达。静止对伤口愈合，器官再生和瘤形成是必不可少的。先前的发现表明微小RNA（miRNA）在调节细胞静止过程中起重要作用。我们最近的出版物静止期间以实例阐述在原代人替代miRNA生物途径包皮成纤维（HFF）细胞的存在。实际上，我们已经发现了一组与由trimethylguanosine合酶1（TGS1）蛋白的2,2,7- trimethylguanosine（TMG）带肩改性PRI-的miRNA（其成熟miRNA发现静止期期间诱导的）的并运输到细胞质通过Exportin-1（XPO1）蛋白质。我们用来抗体针对（TMG）兴趣盖（不与第（m交叉反应 7 G）兴趣帽了大部分PRI-的miRNA或mRNA的含有[鲁曼等人的，1982]），以从增殖或静态HFFS的总RNA提取RNA进行免疫沉淀。该测定的新颖性是PRI-miRNA的以及含有一个TMG-帽修改以外的非编码RNA的特异性分离。
【背景】蜂窝静止，类型可逆生长停滞的，是在伤口愈合，器官再生，和预防瘤形成涉及一种重要的细胞状态（科勒，2011;瓦尔古等人 2012）。已发现小的非编码RNA如miRNA参与细胞静止的调节。 ...
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| Analysis of Replicative Intermediates of Adeno-associated Virus through Hirt Extraction and Southern Blotting
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Adeno-associated virus (AAV) is a small single-stranded DNA virus that requires the presence of a helper virus, such as adenovirus or herpes virus, to efficiently replicate its genome. AAV DNA is replicated by a rolling-hairpin mechanism (Ward, 2006), and during replication several DNA intermediates can be detected. This detailed protocol describes how to analyze the AAV DNA intermediates formed during AAV replication using a modified Hirt extract (Hirt, 1967) procedure and Southern blotting (Southern, 1975).
[摘要] 腺相关病毒（AAV）是一种小型单链DNA病毒，需要存在辅助病毒，如腺病毒或疱疹病毒，以有效地复制其基因组。 AAV DNA通过滚转发夹机制（Ward，2006）进行复制，并且在复制期间可以检测出几种DNA中间体。该详细方案描述了如何使用改良的Hirt提取物（Hirt，1967）程序和Southern印迹（Southern，1975）分析在AAV复制期间形成的AAV DNA中间体。
背景 AAV DNA复制通过滚动发夹机制在由AAV和辅助病毒如腺病毒或疱疹病毒共感染的细胞中进行（Ward，2006）。 AAV DNA由4.7kb的线性DNA分子和倒置的末端重复（ITR）组成，折叠形成T形发夹结构。 3'末端发夹作为AAV DNA复制的引物。这些发夹结构由AAV Rep蛋白再生，允许进一步复制（Im和Muzyczka，1990）。 AAV DNA的+和 - 链都被包装并且是感染性的（Rose等人，1969）。当分析复制AAV DNA时，可以检测到几种复制中间体（Straus等人，1976）。最丰富的复制中间体是由AAV DNA的一个和一个链形成的线性单体双链体分子，其被认为是将包装在预先形成的衣壳中的后代单链分子的直接前体（Straus ，1976）。二聚体复制中间体也是常见的，AAV复制模型与甚至更大的复制中间体相容。 ...
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