| RNA Extraction from Wistar Rat Cochlea for qRT-PCR
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Otology research has developed considerably in recent years and molecular analysis is crucial to identify metabolic pathways and therapeutic targets. However, the structure of the cochlea limits the amount of cell mass, and special care is required for RNA extraction. Studies applying this technique to the cochlea are scarce in the literature, and difficulties in this area exist. In the context, we describe a method for extracting RNA in Wistar rats for qRT-PCR analyses in order to clarify certain aspects and obtain good quality material.
[摘要] 近年来，耳科学研究发展迅速，分子分析对鉴定代谢途径和治疗靶点至关重要。 然而，耳蜗的结构限制了细胞的数量，特别注意RNA提取。 在耳蜗中使用这种技术的研究在文献中很少，而且在这方面存在困难。 在此背景下，我们描述了提取Wistar大鼠的RNA进行qRT-PCR分析的方法，以澄清某些方面并获得优质的材料。
【背景】了解涉及毛细胞损伤的分子机制对于保持听力非常重要。 来自mRNA的qRT-PCR用于代谢途径和可能的治疗靶标的研究。 耳科学研究通常使用小型啮齿动物，尽管用保存良好的RNA分离感觉细胞样品用于转录分析是一个重大挑战。 用这些动物进行的研究已经提出了在新生儿耳蜗中提取RNA的有效方法，然而，由于少量mRNA的回收，成年耳蜗呈现局限性。 为了评估获得的RNA的质量，可以进行紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳。 在此，我们描述了从成年Wistar大鼠获得mRNA的方法，其随后可用于qRT-PCR测定。
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| Nuclei Isolation from Nematode Ascaris
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Preparing nuclei is necessary in a variety of experimental paradigms to study nuclear processes. In this protocol, we describe a method for rapid preparation of large number of relatively pure nuclei from Ascaris embryos or tissues that are ready to be used for further experiments such as chromatin isolation and ChIP-seq, nuclear RNA analyses, or preparation of nuclear extracts (Kang et al., 2016; Wang et al., 2016).
[摘要] 在各种实验范例中准备核是必要的，以研究核过程。在本协议中，我们描述了一种从准备用于进一步实验（如染色质分离和ChIP-seq，核RNA）的蛔虫胚胎或组织快速制备大量相对纯的核的方法分析或准备核提取物（Kang等人，2016; Wang等人，2016）。
背景 核分离通常是研究核事件的分子和生物化学方面的第一步。已经开发了几种方法来分离来自不同组织和细胞类型的细胞核。然而，除了C以外的线虫的细胞核分离方案很少。已经描述了线索，（Ooi等人，2010; Zanin等人，2011; Haenni等人，2012， ）。已经使用寄生线虫蛔虫的胚胎来制备用于体外无细胞系统的各种提取物（Cohen等人，2004） ; Lall等人，2004）。然而，这些提取物通常是全细胞提取物。在这里，我们描述了从线虫蛔虫制备细胞核的方法。
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