{{'Search' | translate}}
 

Sodium chloride

公司名称: Avantor Performance Materials
产品编号: 0278.1000
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Immunostaining of Formaldehyde-fixed Metaphase Chromosome from Untreated and Aphidicolin-treated DT40 Cells
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  During mitosis chromosomes are condensed into dense X-shaped structures that allow for microscopic determination of karyotype as well as inspection of chromosome morphology.

This protocol describes a method to perform immunostaining of formaldehyde-fixed metaphase chromosomes from the avian cell line DT40. It was developed to characterize the localization of YFP-tagged TopBP1 on mitotic chromosomes and specifically determine the percentage of TopBP1 foci that formed on breaks/gaps as well as ends of individual metaphase macrochromosomes (Pedersen et al., 2015). For this ...
[摘要]  在有丝分裂期间,染色体被浓缩成致密X型结构,允许显微检测染色体核型和检查染色体形态。
该方案描述了从禽细胞系DT40进行甲醛固定的中期染色体的免疫染色的方法。 它被开发用于表征YFP标记的TopBP1在有丝分裂染色体上的定位,并且具体确定形成于断裂/间隙以及单个中期大染色体末端的TopBP1灶的百分比(Pedersen等,2015)。 为此,应用YFP的免疫染色。 然而,该协议可以针对其他细胞系或表位进行优化。
【背景】染色中期染色体的显微镜分析是经典的细胞遗传学技术,广泛用于研究和诊断。基本原理包括通过锭子不稳定试剂如谷氨酸诱导中期细胞周期停滞,这将触发主轴装配检查点,从而阻止细胞在中期。这用于富集浓缩染色体的细胞。随后将细胞在低渗溶液中进行溶胀,然后在显微镜载玻片上铺展有丝分裂细胞。最终结果是来自单细胞的显微镜检测染色体,便于染色体核型分析以及个体染色体的研究。传统上,肿胀的细胞用甲醇和乙酸(3:1)固定,然后铺展在载玻片上(Hungerford,1965; Ronne等,1979)。
这里描述的方法使用甲醛而不是甲醇进行固定。这可以用于随后用与甲醇固定不相容的抗体染色。该方案针对鸡DT40细胞的中期传播进行了优化,YFP标记的TopBP1在中期大染色体上的免疫染色(Pedersen等,2015)。 ...

产品评论