| Fish Bile Clean-up for Subsequent Zymography and Mass Spectrometry Proteomic Analyses
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Biliary excretion offers a way to analyze various contaminants in aquatic organisms, and fish bile has been used as a biomarker for environmental contamination. The use of the fish bile proteome as a tool for monitoring the impact of environmental contaminants has been recently validated. However, scarce studies in this context are available, and much remains to be investigated. In this context, this protocol describes a fast, reproducible and cheap biliary clean-up procedure for subsequent proteomic analyses, such as zymography and mass spectrometry.
[摘要] 胆汁排泄提供了分析水生生物中各种污染物的方法，并且鱼胆已被用作环境污染的生物标志物。 最近验证了使用鱼胆蛋白质组作为监测环境污染物影响的工具。 然而，在这方面缺乏研究，还有很多需要调查。 在这种情况下，这个协议描述了一个快速，可重复和廉价的胆道清理程序后续蛋白质组学分析，如酶谱和质谱。
【背景】胆汁排泄是分析水生生物中几种化学污染物的一种替代方法。虽然直到最近，焦点只是检测环境污染物，而不是评估可能的生物化学效应，例如差异蛋白质表达，鱼胆汁已被常规用作环境污染的生物标志物数十年。然而，鱼胆汁蛋白质组最近被验证作为监测环境污染物对鱼代谢的影响的工具。这些包括多环芳香烃（Pampanin等人，2014），金属和类金属（Hauser-Davis等人，2012a）和复杂混合物（ Hauser-Davis et al。，2012b）等污染物。但是，这是一个很新的领域，在这方面还缺乏研究。在这种情况下，鱼胆含有大量的干扰蛋白定量，1D和2D电泳和质谱分析（Hauser-Davis等人，2012b）的脂质和胆汁盐。因此，为了获得可重现的结果，清理过程是至关重要的，并为随后的蛋白质组学应用充分准备这种液体。
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| Induction and Quantification of Patulin Production in Penicillium Species
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Patulin, a worldwide regulated mycotoxin, is primarily produced by Penicillium and Aspergillus species during fruit spoilage. Patulin contamination is a great concern with regard to human health because exposure of the mycotoxin can result in severe acute and chronic toxicity, including neurotoxic, mutagenic, and immunotoxic effects. Penicillium expansum is known as the main producer of patulin. This protocol addresses the cultivation procedure of P. expansum under patulin permissive conditions and describes the method of collection and detection of patulin.
[摘要] Patulin是世界范围内调节的真菌毒素，主要是在水果腐败期间由青霉菌和曲霉菌种生产的。蛋白污染是人类健康的重大问题，因为霉菌毒素的暴露会导致严重的急性和慢性毒性，包括神经毒性，诱变性和免疫毒性作用。青霉素被称为patulin的主要生产者。该协议涉及到P的培育程序。膨化条件下的膨胀，并描述了patulin的收集和检测方法。
背景 丙氨酸是一种聚酮内酯霉菌毒素，是由几种真菌，包括青霉菌，曲霉菌和其他物种产生的。其中，广西青霉菌是一种着名的收获后病原体，在贮存期间引起了果皮果实的腐烂，是主要的生产者。由于毒素引起的严重急性和慢性作用，苹果产品中的蛋白酶水平受到极大的关注。因此，世界上许多国家的食品中的蛋白质水平有限。欧盟委员会（2006年）确定了苹果汁（50μg/ kg），固体苹果产品（25μg/ kg），最重要的是果实婴儿食品（10μg/ kg）的最高允许水平，因为儿童苹果衍生产品的主要消费者。
＆NBSP;近年来对青霉素的研究主要集中在调节蛋白质生产的环境因素，patulin生物合成的分子基础和patulin的生物降解。在这些研究中，嘌呤产生的诱导和定量的方法是重要的。水果中的蛋白质分析通常遵循AOAC方法995.10（Brause等人，1996）。用果胶酶处理后，用醋酸乙酯从果实的腐烂部分提取白蛋白。已经开发了许多用于测量patulin的方法，例如TLC，质谱和气相色谱/质谱。现在，使用紫外光检测（HPLC-UV）的高效液相色谱法是最常用的方法（Baert等人，2007）。 ...
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| Pathogenicity Assay of Penicillium expansum on Apple Fruits
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Penicillium expansum, a widespread filamentous fungus, is a major causative agent of fruit decay and leads to huge economic losses during postharvest storage and shipping. Furthermore, it produces mycotoxin on the infected fruits that may cause harmful effects to human health. This pathogenicity assay involves a stab inoculation procedure of P. expansum on apple fruit, an important experimental technique to study fungal pathogenesis. This assay can be applied to analyze the virulence of postharvest pathogen on other fruits such as orange, pear and kiwifruit.
[摘要] 广泛的青霉菌是广泛的丝状真菌，是果实腐烂的主要致病因素，并在收获后储存和运输中导致巨大的经济损失。此外，它对感染的水果产生霉菌毒素，可能对人体健康造成有害影响。这种致病性测定涉及P的刺刺接种程序。膨化在苹果果实上，是一种重要的实验技术，用于研究真菌发病机制。该测定可用于分析其他水果如橙子，梨和猕猴桃的收获后病原体的毒力。
背景 青霉菌是一种破坏性的采后病原体，在采后处理和储存过程中，许多流行的水果如苹果和梨都会腐烂。造成重大的社会经济影响，对国际贸易产生影响。病原体也可能导致严重的人体健康问题，因为它会产生有毒的次级代谢物，包括patulin，citrinin和球形青霉素（Andersen等，2004）。控制由P引起的腐蚀。膨胀对于确保各种水果的质量和安全性至关重要。
＆NBSP; ＆nbspConidia的 P。膨胀通常通过创伤进入，这是为提供病原体开发起点所必需的（Spotts等人，1998）。 P的致病性通常通过针刺接种来测试果实上的膨胀，其也用于灰葡萄孢与番茄相比，桃花生的致病性测定， 与芒果，等相关的小菜蛾（Colletotrichum gloeosporioides） （Liu等人，2012; Shi等人，2012; ...
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