| Evaluation of the Condition of Respiration and Photosynthesis by Measuring Chlorophyll Fluorescence in Cyanobacteria
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Chlorophyll fluorescence measurements have been widely used to monitor the condition of photosynthesis. Furthermore, chlorophyll fluorescence from cyanobacteria reflects the condition of respiration, since cyanobacterial photosynthesis shares several components of electron transport chain with respiration. This protocol presents the method to monitor the condition of both photosynthesis and respiration in cyanobacteria simply by measuring chlorophyll fluorescence in the dark and in the light with pulse amplitude modulation (PAM) chlorophyll fluorometer.
[摘要] 叶绿素荧光测量已被广泛用于监测光合作用的状况。 此外，蓝细菌的叶绿素荧光反映了呼吸的状况，因为蓝藻光合作用与呼吸作用共享电子传递链的几个组成部分。 该协议提供了监测蓝藻光合作用和呼吸作用的方法，只需通过测量黑暗和光照下的叶绿素荧光以及脉冲幅度调制（PAM）叶绿素荧光计。
【背景】叶绿素荧光测量已广泛用于监测许多光合生物体的光合作用条件（Krause和Weis，1991; Govindjee，1995）。在蓝细菌的情况下，光合原核生物，叶绿素荧光不仅受光合作用条件的影响，而且还受其他代谢途径的影响，这是由于细胞内代谢途径之间的可能相互作用。特别是，光合作用和呼吸作用共享电子传递链的几个组成部分，如蓝细菌中的质体醌（PQ）（Aoki and Katoh，1982; Peschek and Schmetterer，1982）。 PQ池的氧化还原状态通过调节状态转变影响叶绿素荧光的产量（Mullineaux和Allen，1986; Mullineaux等人，1997），其是非天然存在的主要组分，蓝藻中的光化学猝灭（Campbell和Öquist，1996）。因此，蓝藻呼吸链直接影响叶绿素荧光，特别是在光合作用不活跃的黑暗中。
由于呼吸的影响，应谨慎测量叶绿素荧光以精确估计蓝藻中的光合作用（Ogawa et ...
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| Investigating Localization of Chimeric Transporter Proteins within Chloroplasts of Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] In this protocol, we describe a method to design chimeric proteins for specific targeting to the inner envelope membrane (IEM) of Arabidopsis chloroplasts and the confirmation of their localization by biochemical analysis. Specific targeting to the chloroplast IEM can be achieved by fusing the protein of interest with a transit peptide and an IEM targeting signal. This protocol makes it possible to investigate the localization of chimeric proteins in chloroplasts using a small number of transgenic plants by using a modified method of chloroplast isolation and fractionation. IEM ...
[摘要] 在这个协议中，我们描述了一种设计嵌合蛋白的方法，用于特异性靶向拟南芥叶绿体的内包膜（IEM）并通过生化分析确定它们的定位。 叶绿体IEM的特异性靶向可通过将感兴趣的蛋白质与转运肽和IEM靶向信号融合来实现。 这个协议使得有可能使用少量的转基因植物，通过使用修改的叶绿体分离和分离方法来研究嵌合蛋白在叶绿体中的定位。 嵌合蛋白的IEM定位可以通过胰蛋白酶消化和碱性提取进一步评估。 在此，称为SbtAII的嵌合碳酸氢根转运蛋白的定位通过使用针对葡萄球菌蛋白A的抗体进行蛋白质印迹来检测。该方案改编自上原等人，2016年
【背景】有人提出将蓝藻CO 2浓度机制整合到叶绿体中是改善C 3+植物光合作用的有希望的方法。 根据理论估计，将BicA和SbtA整合到叶绿体IEM中可以提高光合CO 2固定率。 我们研究了核编码的蓝细菌碳酸氢盐转运蛋白BicA和SbtA与拟南芥叶绿体的IEM的整合。 因此，我们制定了一个协议，设计嵌合构造为特定目标的IEM和调查嵌合蛋白在叶绿体中的定位。
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| Generation of Chemically Induced Liver Progenitors (CLiPs) from Rat Adult Hepatocytes
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Primary mature hepatocytes (MHs) or their progenitor cells are candidate cell sources for cell transplantation therapy in severe liver diseases. However, stable culture of these cells or generation of equivalent cells from pluripotent stem cells has been limited. Using a cocktail of small molecules that we previously found useful in stable culture of multiple types of stem/progenitor cells, we recently established a novel method to generate bipotent liver progenitor cells, named chemically induced liver progenitors (CLiPs), from adult rat MHs. Here, we describe a detailed protocol for the ...
[摘要] 原代成熟肝细胞（MH）或其祖细胞是重症肝病中细胞移植治疗的候选细胞来源。然而，这些细胞的稳定培养或多能干细胞的等效细胞的产生受到限制。我们使用先前在多种类型的干/祖细胞稳定培养中发现有用的小分子混合物，最近建立了一种从成年大鼠MHs产生双能肝脏祖细胞（命名为化学诱导肝祖细胞（CLiPs））的新方法。在这里，我们描述了诱导大鼠CLiPs的详细方案。我们首先描述分离原代鼠MH的方法，然后描述如何从这些MH中诱导CLiPs。另外，我们描述了一种评估产生的CLiPs分化成肝细胞和胆管上皮细胞的双能性的方法。我们还介绍了如何通过长期的文化和详细的示例数据建立稳定的CLiP。可以在2周内产生初级CLiPs，并且可以在2.5-4个月内建立经历10次传代的稳定的CLiPs，批次间变异性。
【背景】对于实现肝病再生医学的新型细胞来源有着强烈的需求。目前唯一的治疗终末期肝病的方法是肝移植，但是由于供者短缺，其应用受到限制。最近，我们小组提出了一种产生能够在体外稳定地扩增的新型LPC的方法，并且可以以广泛的效率重新繁殖慢性肝炎动物模型的损伤肝脏（Katsuda等人， / ...
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