| Rapid Screening and Evaluation of Maize Seedling Resistance to Stalk Rot Caused by Fusarium spp.
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Corn stalk rot caused by Fusarium spp., a genus of soil-borne fungal pathogens, has become a major concern of maize production. This disease normally causes significant reduction of maize yield and quality worldwide. The field assay for identifying stalk rot resistance using adult plants is largely relying on large population, yet time-consuming, labor costs, and often influenced by environmental conditions. Therefore, a rapid and reliable assay for investigating maize stalk rot caused by Fusarium spp. is required for screening the resistant lines and functional study of ...
[摘要] 由镰刀菌属（一种土壤真菌病原体）引起的玉米茎腐病已成为玉米生产的主要问题。这种疾病通常会导致全球玉米产量和质量的显着降低。使用成年植物鉴定茎腐病抗性的田间试验在很大程度上依赖于大量人群，但费时费力，并且通常受环境条件的影响。因此，用于快速可靠的检测由镰刀霉属引起的玉米茎腐病的检测。是筛选玉米对这种病原体的抗性品系和功能研究所必需的。我们开发了一种幼苗分析方法，用12天到2周龄的幼苗快速筛选抗性品系。整个测定可以在种子萌发后约16-18天内完成，其中廉价的劳动力成本和高重复性。这种简单，快速和可靠的检测方法可以广泛用于鉴定玉米对由镰刀霉引起的茎腐病的抗性。和其他类似的真菌病原体。
【背景】玉米是全球最重要的主粮作物和能源植物之一。自2012年以来，它已成为中国乃至全世界第一大产量和种植面积的作物品种。然而，玉米秸秆腐烂已成为最具破坏性的疾病之一，其通常导致玉米产量大幅下降和玉米质量下降（Oerke，2006）。引起玉米秸秆腐烂的病原体主要包括土壤真菌物种，例如禾谷镰刀菌F， （Verticillioides）， ...
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| Generating Loss-of-function iPSC Lines with Combined CRISPR Indel Formation and Reprogramming from Human Fibroblasts
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] For both disease and basic science research, loss-of-function (LOF) mutations are vitally important. Herein, we provide a simple stream-lined protocol for generating LOF iPSC lines that circumvents the technical challenges of traditional gene-editing and cloning of established iPSC lines by combining the introduction of the CRISPR vector concurrently with episomal reprogramming plasmids into fibroblasts. Our experiments have produced nearly even numbers of all 3 genotypes in autosomal genes. In addition, we provide a detailed approach for maintaining and genotyping 96-well plates of iPSC ...
[摘要] 对于疾病和基础科学研究而言，功能丧失（LOF）突变是非常重要的。 在这里，我们提供了一个简单的流线化协议来产生LOF iPSC系列，通过将CRISPR载体与附加型重编程质粒同时引入成纤维细胞，规避了传统基因编辑和已建立的iPSC系的克隆的技术挑战。 我们的实验已经产生了常染色体基因中所有3种基因型的几乎偶数。 此外，我们提供了一个详细的方法来维护和iPSC克隆的96孔板的基因分型。
【背景】CRISPR / Cas9技术允许简单且特异地针对特定基因组位置进行基因编辑。将该技术与诱导性多能干细胞（iPSC）的疾病建模和再生医学潜力相结合将继续对生物医学研究产生前所未有的影响。然而，使CRISPR / Cas9系统适应iPSC已经提出了几个挑战。在细胞系中进行基因编辑的传统方法是用表达Cas9蛋白质的质粒和指导RNA（gRNA）转染细胞，然后产生单克隆并筛选所需的遗传改变。不幸的是，iPSC不适用于单细胞克隆。已经开发了几种补充媒介和克隆方法来克服这一困难，但仍然充满昂贵的设备（低氧培养箱），困难的技术步骤（FACS分选的单个iPSC的存活）或劳动密集型方案（亚克隆）（Forsyth ，2006; Miyaoka ...
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| FACS-based Isolation of Neural and Glioma Stem Cell Populations from Fresh Human Tissues Utilizing EGF Ligand
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Direct isolation of human neural and glioma stem cells from fresh tissues permits their biological study without prior culture and may capture novel aspects of their molecular phenotype in their native state. Recently, we demonstrated the ability to prospectively isolate stem cell populations from fresh human germinal matrix and glioblastoma samples, exploiting the ability of cells to bind the Epidermal Growth Factor (EGF) ligand in fluorescence-activated cell sorting (FACS). We demonstrated that FACS-isolated EGF-bound neural and glioblastoma populations encompass the sphere-forming colonies in ...
[摘要] 从新鲜组织中直接分离人类神经和胶质瘤干细胞允许其在没有事先培养的情况下进行生物学研究，并且可以在其天然状态中捕获其分子表型的新方面。最近，我们展示了前瞻性地从新鲜人类生发基质和胶质母细胞瘤样品中分离干细胞群的能力，利用细胞在荧光激活细胞分选（FACS）中结合表皮生长因子（EGF）配体的能力。我们证明FACS分离的EGF结合的神经和成胶质细胞瘤细胞群体在体外包含球体形成的集落，并且能够自我更新和多向分化。在此我们详细描述了具有来自新鲜死亡和手术组织的干细胞特性的EGF-结合（即EGFR +）人类神经和胶质瘤细胞的纯化方法。利用天然配体结合能力前瞻性分离干细胞群的能力为了解非培养条件下的正常和肿瘤细胞生物学打开了新的门，并且适用于在种群和单细胞分辨率下的各种下游分子测序研究。
【背景】由于缺乏通用的神经和神经胶质瘤干细胞标志物（Lathia et al。，2015）以及频繁依赖于培养的细胞，理解人神经和胶质瘤干细胞的内在生物学一直是一个挑战比那些直接从组织分离的。跨膜糖蛋白Prominin或CD133是分离神经（Uchida等，2000）和神经胶质瘤干细胞（GSC）（Singh等，2000）的最好描述和经常使用的干细胞标记物之一。等人，2003; Singh等人，2004; ...
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