| Enzymatic Assays and Enzyme Histochemistry of Tuta absoluta Feeding on Tomato Leaves
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Enzymes play a key role in insect-plant relationships. For a better understanding of these interactions, we analyzed Tuta absoluta digestive enzymes. Here, we describe a detailed protocol for the detection of trypsin and papain-like enzymes in Tuta absoluta larvae by enzyme histochemistry. This assay uses frozen and unfixed samples to avoid the loss of enzymatic activity. We also describe a protocol for the quantification of trypsin and papain-like enzymes in the larvae of Tuta absoluta at different developmental instars.
[摘要] 酶在昆虫植物关系中起着关键作用。 为了更好地理解这些相互作用，我们分析了 Tuta absoluta 消化酶。 在这里，我们描述了通过酶组织化学检测 Tuta absoluta 幼虫中的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的详细方案。 该测定使用冷冻和未固定的样品以避免酶活性的丧失。 我们还描述了在不同发育期的 Tuta absoluta 幼虫中量化胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的方案。
【背景】植物和昆虫共存了数百万年，并进化出一系列相互作用，影响不同水平的生物。昆虫设法发展不同的生理和形态适应，以克服植物防御机制。因此，更好地了解其重要功能将有助于其有针对性的控制。昆虫的不同生理功能依赖于酶：消化，呼吸，循环，肌肉，神经，生殖和内分泌。几种酶参与消化。蛋白酶如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶或羧肽酶是蛋白质消化的原因，蛋白质消化是昆虫的氨基酸来源。因此，消化蛋白酶抑制剂已被成功用于提高植物对昆虫的抗性（Smigocki et al。，2013; Quilis et al。，2014; Hamza et al ...
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| Monitoring the Targeting of Cathepsin D to the Lysosome by Metabolic Labeling and Pulse-chase Analysis
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Mannose 6-phosphate receptors function can be studied in living cells by investigating alterations in processing and secretion of their ligand Cathepsin D. The assay described here is well established in the literature and comprises the metabolic labeling of newly synthesized proteins with [35S] methionine-cysteine in HeLa cells to monitor Cathepsin D processing through secretory pathway and secretion using immunoprecipitation, SDS-PAGE and fluorography.
[摘要] 通过研究其配体组织蛋白酶D的加工和分泌的改变，可以在活细胞中研究甘露糖-6-磷酸受体功能。在此描述的测定在文献中已经很好地确定，并且包括新合成的蛋白质的代谢标记，其中[35 [S]甲硫氨酸半胱氨酸，以监测组织蛋白酶D处理，通过分泌途径和分泌使用免疫沉淀，SDS-PAGE和荧光。
【背景】组织蛋白酶d（CATD）是一种溶酶体天冬氨酸蛋白酶由甘露糖-6-磷酸受体（M6PRs）排序在哺乳动物细胞中该传输它从反面高尔基体网络到内涵体/溶酶体（戈什等人，2003 ）。将CatD合成为前体蛋白（〜52kDa），其在溶酶体中被切割以产生中间体（〜48kDa）或成熟的溶酶体形式（〜34kDa）。微量的前体蛋白质也从生物合成途径分泌（Benes et al。，2008）。 catD的丰度可以使用几种方法来确定，例如基于免疫荧光的染色（Poole等人，1972），蛋白质印迹，荧光活性测定（Bewley等人， （Hirst等人，2009; Kametaka等人，2007; Tavares等人，2011）或用脉冲追踪分析进行代谢标记（Hirst等人，2009; Kametaka等人， ...
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| Simple Spectroscopic Determination of Nitrate, Nitrite, and Ammonium in Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Plants use nitrate, nitrite, and ammonium as inorganic nitrogen (N) sources. These N compounds are included in plant tissues at various concentrations depending on the balance between their uptake and assimilation. Thus, the contents of nitrate, nitrite, and ammonium are physiological indicators of plant N economy. Here, we describe a protocol for measurement of these inorganic N species in A. thaliana shoots or roots.
[摘要] 植物使用硝酸盐，亚硝酸盐和铵作为无机氮（N）源。这些N化合物根据其吸收和同化之间的平衡以各种浓度包含在植物组织中。因此，硝酸盐，亚硝酸盐和铵的含量是植物N经济的生理指标。在这里，我们描述了在A中测量这些无机N物质的方案。 thaliana 芽或根。
背景 无机氮含量的测定对于预测植物吸收和吸收氮的能力很重要。研究人员经常使用需要昂贵设备的技术，如高效液相色谱（HPLC），用于这些测量。本协议基于通用光谱法与廉价的试剂，使其适用于许多研究人员。在酸性条件下，硝酸盐引起水杨酸的硝化，随后加入碱性溶液会导致黄色复合物。在酸性条件下，亚硝酸盐与磺胺类反应产生重氮化合物，其与N - （1-萘基）乙二胺进行重氮偶联，形成粉红色偶氮化合物。在硝普钠盐的催化作用下，铵可以测定为蓝色靛酚衍生物。每个实验程序容易，快速，简单。
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