| In vivo Priming of T Cells with in vitro Pulsed Dendritic Cells: Popliteal Lymph Node Assay
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] One-way mixed lymphocyte reaction (MLR) is a classic tool to measure how T cells react to external stimuli. However, MLR is an in vitro reaction system, which shows different response intensity compared with in vivo trails sometimes due to the lack of cytokines, tissue matrix and other immune response associated factors. The following popliteal lymph node assay (PLNA) protocol is designed to test the T cells antigen-specific reaction in vivo by using ovalbumin (OVA) specific reacted transgenic mouse OT-1 and OT-2.
[摘要] 单向混合淋巴细胞反应（MLR）是测量T细胞如何与外部刺激反应的经典工具。 然而，MLR是体外反应系统，其与体内踪迹相比显示出不同的反应强度，有时由于缺乏细胞因子，组织基质和其他免疫应答相关因素。 设计了以下po淋巴结测定（PLNA）方案，通过使用卵白蛋白（OVA）特异性反应的转基因小鼠OT-1和OT-2，体内测试T细胞抗原特异性反应。
【背景】在移植中，自身免疫和感染研究中，单向混合淋巴细胞反应（MLR）是评估T细胞增殖在抗原存在细胞（APC）或其他外部刺激反应中是否增加或抑制的有用参数。 这是一个典型的功能测试，它展示了T细胞如何受到免疫抑制药物（Hou et al。，2015; Zhang et al。，2015），阴性细胞或外来体疫苗（Ma）的测试试剂的影响 et al。，2016; Cai et al。，2017）。
然而，由于体外免疫反应系统，该系统具有一定的限制。 体内免疫反应受生物微环境的影响，如细胞因子，趋化因子，激素分泌，组织基质等未知生物因子。
在这里，po淋巴结测定（PLNA）被设计为体内工具，通过使用卵白蛋白（OVA）抗原特异性反应系统来测试增加或减少的免疫应答（Bhatt等，2014; Cai et al。，2017）。
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| Antisense Oligonucleotide-mediated Knockdown in Mammary Tumor Organoids
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Primary mammary tumor organoids grown in 3D are an excellent system to study tumor biology. They resemble the organization and physiology of native epithelia more closely than cancer cell lines grown in 2D, and additionally model interactions with the ECM (Boj et al., 2015; Clevers, 2016; Shamir and Ewald, 2014). Mammary tumor organoids are therefore a promising model system to identify and characterize novel drivers of breast cancer that would be unlikely to be identified using 2D cell lines. Antisense oligonucleotides can be used to efficiently and specifically knockdown target ...
[摘要] 在3D生长的原发性乳腺肿瘤组织是研究肿瘤生物学的优秀系统。 它们类似于天然上皮的组织和生理学，比2D生长的癌细胞系更为紧密，另外还与ECM的模型相互作用（Boj et al。，2015; Clevers，2016; Shamir and Ewald，2014）。 因此，乳腺肿瘤组织因子是一种有希望的模型系统，用于识别和表征不可能使用2D细胞系识别的乳腺癌的新型驱动因素。 反义寡核苷酸可用于有效和特异地敲低细胞中的靶基因（Bennett等，2017）。 它们可以被有机物自由摄取，而不需要转染剂，使其成为常规实验室研究和筛选的便捷工具。
【背景】乳腺癌是全世界妇女中最常见的恶性肿瘤，是妇女癌症死亡率的第二大原因（Siegel等，2017）。为了改善现有的治疗方案，确定和调查具有预防乳腺癌进展潜力的新分子靶标至关重要。我们应用RNA-seq来产生与正常乳腺上皮细胞相比在原发性乳腺肿瘤中失调的长非编码RNA（lncRNA）的综合目录，并将30个先前未表征的lncRNA作为乳腺肿瘤相关RNA（MaTARs）进行优先排序。为了功能评估MaTARs作为肿瘤进展的关键驱动因素，我们对3D乳腺肿瘤组织中的所有30个MaTARs进行了反义寡核苷酸（ASO）介导的敲低分析（Diermeier等，2016）。
ASO是短（20-mers），含有硫代磷酸酯修饰的核苷酸的单链DNA分子以及2'-ribose（5-10-5 ...
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| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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