| Single-molecule Analysis of DNA Replication Dynamics in Budding Yeast and Human Cells by DNA Combing
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] The DNA combing method allows the analysis of DNA replication at the level of individual DNA molecules stretched along silane-coated glass coverslips. Before DNA extraction, ongoing DNA synthesis is labeled with halogenated analogues of thymidine. Replication tracks are visualized by immunofluorescence using specific antibodies. Unlike biochemical and NGS-based methods, DNA combing provides unique information on cell-to-cell variations in DNA replication profiles, including initiation and elongation. Finally, this assay can be used to monitor the effect of DNA lesions on fork progression, ...
[摘要] DNA梳理方法允许在沿着硅烷涂覆的玻璃盖玻片拉伸的单个DNA分子的水平上分析DNA复制。在DNA提取前，进行的DNA合成用胸苷的卤化类似物标记。使用特异性抗体通过免疫荧光可视化复制轨迹。与生物化学和基于NGS的方法不同，DNA梳理提供了DNA复制谱中细胞间细胞变化的独特信息，包括引发和延长。最后，该测定可用于监测DNA损伤对叉进展，停止和重新启动的影响。
背景 在称为复制起点的真核染色体上的数千个位点处启动DNA合成。原始激活遵循由检查点激酶和染色质的表观遗传修饰（Prioleau和MacAlpine，2016）控制的定义良好的复制计时程序。复制叉在正常S阶段经常停顿。叉停止是由多个事件引起的，例如DNA损伤，紧密结合的蛋白质复合物和高表达基因的转录（Tourriere和Pasero 2007; Zeman and Cimprich，2013）。真核生物已经制定了不同的策略来应对这种复制压力，包括修复机制来重新启动捕获的叉子和激活休眠复制起源以抢救终末抓捕的叉。
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| Muscle Histology Characterization Using H&E Staining and Muscle Fiber Type Classification Using Immunofluorescence Staining
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Muscle function is determined by its structure and fiber type composition. Here we describe a protocol to examine muscle histology and myofiber types using hematoxylin and eosin (H&E) and immunofluorescence staining, respectively. H&E stain nucleus in blue and cytoplasm in red, therefore allowing for morphological analyses, such as myofiber diameter, the presence of degenerated and regenerated myofibers, and adipocytes and fibrotic cells. Muscle fibers in adult skeletal muscles of rodents are classified into 4 subtypes based on the expression of myosin heavy chain proteins: Myh7 (type I ...
[摘要] 肌肉功能由其结构和纤维类型组成决定。 这里我们描述一个协议，分别检查使用苏木精和伊红（H＆E）和免疫荧光染色的肌肉组织学和肌纤维类型。 H＆E在蓝色和细胞质红色染色核，因此允许形态学分析，如肌纤维直径，退化和再生肌纤维的存在，以及脂肪细胞和纤维化细胞。 基于肌球蛋白重链蛋白Myh7（I型纤维），Myh2（IIA型纤维），Myh1（IIX型纤维），Myh4（IIB型纤维）的表达，将啮齿动物成年骨骼肌肌肉纤维分为4种亚型：。 一组单克隆抗体可用于特异性标记这些肌纤维亚型。 这些方案通常用于肌肉发育，生长和再生的研究（例如：Wang等，2015; Nie等，2016; Yue et al。，2016; Wang et al。，2017）。
【背景】骨骼肌由肌细胞，脂肪细胞，成纤维细胞和其他细胞类型组成。 多核心肌细胞，骨骼肌的主要组成，也称为肌纤维（肌纤维）。 肌肉组织学研究是肌肉功能研究的常规方法。 一般来说，肌纤维的直径和脂肪细胞的程度和纤维化面积与肌肉力量有关（Yue et al。，2016）。 此外，中心有核肌纤维的存在作为肌肉再生期间新再生肌纤维的替代指标（Wang等，2017）。 基于差异代谢性状和肌球蛋白重链（MyHC）亚型的表达，肌纤维分为四种类型（I，IIa，IIx和IIb）。 ...
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