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CYCLOMIXERS / VORTEX MIXERS

公司名称: REMI GROUP
产品编号: CM-101
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A Protocol of Using White/Red Color Assay to Measure Amyloid-induced Oxidative Stress in Saccharomyces cerevisiae
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract]  The yeast Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) harboring ade1 or ade2 mutations manifest red colony color phenotype on rich yeast medium YPD. In these mutants, intermediate metabolites of adenine biosynthesis pathway are accumulated. Accumulated intermediates, in the presence of reduced glutathione, are transported to the vacuoles, whereupon the development of the red color phenotype occurs. Here, we describe a method to score for presence of oxidative stress upon expression of amyloid-like proteins that would convert the red phenotype of ade1/ade2 ... [摘要]  携带 ade1 或 ade2 突变体的酵母酿酒酵母( S。cerevisiae )在富酵母上显示红色菌落色表型 中等YPD。 在这些突变体中,积累了腺嘌呤生物合成途径的中间代谢物。 在还原型谷胱甘肽存在下,累积的中间体被转移到空泡中,由此发生红色表型的发生。 在这里,我们描述了一种通过淀粉样样蛋白的表达来评估氧化应激存在的方法,其将将ade1 / ade2突变体酵母的红色表型转化为白色。 该测定可能是用于筛选具有抗淀粉样蛋白聚集或抗氧化应激效力的药物的有用工具。
【背景】ADE1或ADE2基因的酵母(Saccharomyces cerevisiae)突变体(例如,,ade1Δ,ade2Δ ade1-14 ade2-),当在YPD(酵母蛋白胨葡萄糖)培养基上生长时,作为腺嘌呤生物合成途径的中间代谢物的液泡(Sharma等人,2003)。包含早熟终止密码子的可抑制等位基因ade1-14 已被广泛用于评价翻译的朊病毒状态终止因子Sup35蛋白。在[ psi - ]酵母中,Sup35p保持可溶性和功能性,因此翻译在有效地终止于ade1-14的早熟终止密码子>等位基因导致截短和非功能性Ade1蛋白的合成。因此,腺嘌呤生物合成级联保持不完整,导致中间体代谢产物的积累,产生酵母的红色表型。相比之下,在[PSI + ...

Fluorescently Labelled Aerolysin (FLAER) Labelling of Candida albicans Cells
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract]  In this protocol we describe a nonradiolabelled labelling of GPI anchor in Candida albicans. The method uses a fluorescent probe to bind specifically to GPI anchors so that the level of GPI-anchored proteins at the cell surface can be measured. The labelling does not need permeabilization of cells and can be carried out in vivo. [摘要]  在本协议中,我们描述了白色念珠菌中GPI锚的非放射性标记标记。该方法使用荧光探针特异性结合GPI锚点,从而可以测量细胞表面的GPI锚定蛋白的水平。标记不需要细胞的透化,并且可以在体内进行进行。

背景 GPI(糖基磷脂酰肌醇)锚是在内质网(ER)中发生的翻译后修饰。预先形成的GPI锚定体连接到携带GPI锚定附着信号序列的特异性蛋白质的C末端的ER的内腔中。这些蛋白质随后通过分泌途径转移(并进一步修饰)到细胞表面,其中蛋白质锚定在质膜的细胞外小叶上或共价连接到具有壁的生物中的细胞壁。各种蛋白质在真核生物中获得GPI锚定蛋白,例如水解酶,细胞表面粘附分子或受体蛋白(Orlean和Menon,2007)。在真菌病原体中,例如白色念珠菌,参与宿主识别和粘附的许多粘附素以及几种发病机理和毒力因子是GPI锚定蛋白;此外,白色念珠菌中的几种GPI锚定蛋白具有蛋白水解活性(Richard和Plaine,2007; Nobile等人,2008)。该途径在白色念珠菌中是必不可少的,并且其下调或靶向它可能是打击念珠菌感染的有用策略。本文详细阐述了用于评估白色念珠菌中GPI锚定水平的方案。
 荧光标记的Aerolysin(FLAER)是荧光素标记的非溶性细胞溶解素的无活性衍生物,革兰氏阴性细菌毒素,其与真核宿主的细胞膜中的GPI锚定的蛋白质结合并形成孔(Howard等, ...

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