| Rapid IFM Dissection for Visualizing Fluorescently Tagged Sarcomeric Proteins
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Sarcomeres, the smallest contractile unit of muscles, are arguably the most impressive actomyosin structure. Yet a complete understanding of sarcomere formation and maintenance is missing. The Drosophila indirect flight muscle (IFM) has proven to be a very valuable model to study sarcomeres. Here, we present a protocol for the rapid dissection of IFM and analysis of sarcomeres using fluorescently tagged proteins.
[摘要] 肌肉最小的收缩单位肌肉，可以说是最令人印象深刻的肌动球蛋白结构。 然而，缺少对肌节形成和维护的完整理解。 果蝇间接飞行肌肉（IFM）已被证明是研究肌节的一个非常有价值的模型。 在这里，我们提出了快速解剖IFM和使用荧光标记的蛋白质分析肌节的协议。
【背景】能够使横纹肌纤维收缩的细胞骨架结构是数以百计的称为肌原纤维的电缆。肌原纤维又是一系列连续排列的肌节，全部同时收缩。肌节是完美对称的结构，包含收缩所需的所有元素。在肌节的中心位置是M-线，其中肌球蛋白粗丝被锚定。在肌小节的侧面是Z-盘，其中肌动蛋白细丝被锚定。
肌营养不良是导致进行性骨骼肌无力的遗传性疾病（Schröder和Schoser，2009）。对于肌营养不良症，目前尚无法治愈，可能是由于对肌营养不良症基础的分子机制的不完全理解（Olive et al。，2013）。黑腹果蝇是一种有效的遗传模式生物，由于其生命周期短，经济的维护和丰富的可利用资源而被用于研究肌肉生物学（Hales等人，2015; Wangler等，等人，2015年）。
在果蝇中的飞行由间接飞行肌肉（IFM）（苍蝇中最大的肌肉）的同步动作驱动，后者被进一步细分为背纵肌（DLM）和背腹肌（DVM）。 ...
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| Isolation and Infection of Drosophila Primary Hemocytes
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Phagocytosis of invading pathogens and their subsequent clearance in lysosomes is important for organismal fitness. We have devised the following protocol to extract phagocytic hemocytes from wild-type and mutant Drosophila larvae and infect the isolated hemocytes with GFP-labeled E. coli to measure the rate of phagocytosis and degradation within individual hemocytes over time.
[摘要] 入侵病原体的吞噬作用及其随后在溶酶体中的清除对于有机体适应性是重要的。我们设计了以下方案从野生型和突变型果蝇幼虫中提取吞噬性血细胞，并用GFP标记的E感染分离的血细胞。大肠杆菌以测量个体血细胞内吞噬和降解的速度。
背景 下面描述的实验可用于研究吞噬体的生物发生，成熟和向溶酶体的递送。细菌积累已经在免疫受损的果蝇的背景下得到充分的研究，其具有IMD或Toll信号传导中的缺陷，并导致抗微生物肽的表达降低（例如，Lemaitre和Hoffmann ，2007; Kleino和Silverman，2014）。细菌感染的细胞响应在果蝇中的研究较少，大多数研究集中于干扰血细胞对细菌的最初吞噬吞噬的突变（Kocks等人，2005年） ;帕森斯和福利，2016）。这种细菌摄取是直接使用FACS分析进行测量（Tirouvanziam等人，2004）。然而，对于吞噬体成熟的详细分析，我们发现检查附着在玻璃盖板上的个体血细胞是有利的（Akbar等人，2011; Rahman等人。 ，2012; Akbar等人，2016），因为这个过程为我们研究吞噬体成熟提供了时间和空间分辨率的最佳组合。
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