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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] The aim of many in vitro models of acute or chronic degenerative disorders in the neurobiology field is the assessment of survival or damage of neuronal cells. Damage of cells is associated with loss of outer cell membrane integrity and leakage of cytoplasmic cellular proteins. Therefore, activity assays of cytoplasmic enzymes in supernatants of cell cultures serve as a practicable tool for quantification of cellular injury (Koh and Choi, 1987; Bruer et al., 1997). Lactate dehydrogenase (LDH) is such a ubiquitously expressed cytosolic enzyme, which is very stable due to a ...
[摘要] 神经生物学领域中许多急性或慢性退行性疾病的体外模型的目的是评估神经元细胞的存活或损伤。细胞损伤与外细胞膜完整性的丧失和细胞质细胞蛋白的泄漏有关。因此，细胞培养上清液中细胞质酶的活性测定作为细胞损伤定量的实用工具（Koh和Choi，1987; Bruer等，1997）。乳酸脱氢酶（LDH）是一种无处不在表达的细胞溶质酶，由于蛋白质的半衰期很长，其稳定性很高（Hsieh和Blumenthal，1956; Koh和Cotman，1992; Koh等人）。 ，1995）。
背景 LDH在可逆的生物化学反应中催化丙酮酸和还原的烟酰胺偶氮二核苷酸（NADH）的乳酸盐和烟酰胺氨基茚三核苷酸（NAD +）的形成。 NADH在340nm的波长上具有吸收。这种动力学LDH活性测定的基础是由NADH降低引起的特定波长处的光密度降低。使用具有已知LDH活性的标准酶溶液计算上清液中LDH的量。不同的细胞密度或代谢活化率可能是混杂的;因此推荐LDH活性的正常化。这是通过评估外部细胞膜裂解后不抑制LDH活性的LDH活性（用0.5％Triton-X“完全杀死”）来实现的。最后，通过完全杀死的LDH活性的绝对LDH活性百分比表示细胞培养物中损伤或死细胞的发生率。
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