| Tracking Lipid Transfer by Fatty Acid Isotopolog Profiling from Host Plants to Arbuscular Mycorrhiza Fungi
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Lipid transfer from host plants to arbuscular mycorrhiza fungi was hypothesized for several years because sequenced arbuscular mycorrhiza fungal genomes lack genes encoding cytosolic fatty acid synthase (Wewer et al., 2014; Rich et al., 2017). It was finally shown by two independent experimental approaches (Jiang et al., 2017; Keymer et al., 2017; Luginbuehl et al., 2017). One approach used a technique called isotopolog profiling (Keymer et al., 2017). Isotopologs are molecules, which differ only in their isotopic composition. For ...
[摘要] 因为测序的丛枝菌根真菌基因组缺乏编码胞质脂肪酸合酶的基因（Wewer等人，2014; Rich等人，2014），因此假定脂质从宿主植物转移到丛枝菌根真菌数年。 / em>，2017）。最终通过两种独立的实验方法（Jiang等人，2017; Keymer等人，2017; Luginbuehl等人， ）， 2017年）。一种方法使用称为同位素体谱分析的技术（Keymer等人，2017）。同位素体是分子，它们的同位素组成不同。对于同位素生物学分析，生物体被喂以重同位素标记的前体代谢物。随后，通过质谱分析代谢产物的标记同位素组成。检测到的目标代谢物的同位素体模式产生关于代谢途径和通量的信息（Ahmed et al。，2014）。以下协议描述了一个实验装置，该装置能够在由丛枝菌根真菌及其相关真菌胞外菌丝体定植的植物根中分离出脂肪酸的单独同位素分布图，以阐明两种共生生物之间的通量。我们预测，如果两种相互作用的生物体可以物理分离，则该策略还可以用于研究其他生物体之间的代谢物通量。
【背景】丛枝菌根真菌是生物营养生物。因此，它们不能独立栽培，而是依靠与寄主植物的相互作用来维持生命并完成它们的生命周期。这一特征使得研究两种共生生物，特别是单独的真菌具有挑战性。
为了培养，处理和收获与宿主根分开的真菌，开发了2室培养皿系统，并将其用于以前工作中的标记研究（Bécard和Fortin，1988; ...
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| Assessing Long-distance Transport from Photosynthetic Source Leaves to Heterotrophic Sink Organs with [14C]CO2
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2017-12-20
[Abstract] Phloem loading and transport of photoassimilate from photoautotrophic source leaves to heterotrophic sink organs are essential physiological processes that help the disparate organs of a plant function as a single, unified organism. We present three protocols we routinely use in combination with each other to assess (1) the relative rates of sucrose (Suc) loading into the phloem vascular system of mature leaves (Yadav et al., 2017a), (2) the relative rates of carbon loading and transport through the phloem (Yadav et al., 2017b), and (3) the relative rates of carbon unloading ...
[摘要] 来自光合自养源的光合同化物的韧皮部装载和运输到异养宿主器官是必不可少的生理过程，其帮助植物的不同器官作为单一的统一生物体起作用。我们提出了三种方案，我们经常使用它们相互结合来评估（1）蔗糖（Suc）加载到成熟叶片的韧皮部血管系统中的相对比率（Yadav等人，2017a）， （2）通过韧皮部的碳载量和运输的相对速率（Yadav等人，2017b），和（3）碳长期释放到异养池器官特别是根中的相对速率距离传输（这个协议）。我们建议，在实验和对照植物上进行所有三种方案提供了全植物碳分配的可靠比较，并且将与单独进行的单一方案相关联的歧义降至最低（Dasgupta等人，2014; Khadilkar 。，2016）。在该方案中，在源叶片和韧皮部装载和运输14 C标签到异养宿主器官中，[14 C] CO 2 2被光致同化，尤其是根，通过闪烁计数进行量化。使用该协议，我们证明在拟南芥的伴侣细胞中蔗糖转运蛋白和液泡质子泵激焦磷酸酶的过表达增强了14 C标记光合同化物向宿主器官的转运（Dasgupta <等人，2014; Khadilkar等人，2016）。这种方法可以适用于量化其他植物物种的长途运输。
【背景】通过从自养源器官到异养池的韧皮部的长途运输是植物生长和产量的基础。根据其在植物中的作用和位置及其在该地区的主要功能，韧皮部网络通常分为收集韧皮部，运输韧皮部和释放韧皮部（Ayre，2011）。收集韧皮部是糖和其他化合物装入韧皮部以准备运输的地方。在已建立的植物中，收集韧皮部是发生韧皮部负载的成熟，光自养叶子的小脉。我们的第一个伴侣协议（Yadav ...
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| Ensifer-mediated Arabidopsis thaliana Root Transformation (E-ART): A Protocol to Analyse the Factors that Support Ensifer-mediated Transformation (EMT) of Plant Cells
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Ensifer adhaerens OV14, a soil borne alpha-proteobacteria of the Rhizobiaceae family, fortifies the novel plant transformation technology platform termed ‘Ensifer-mediated transformation’ (EMT). EMT can stably transform both monocot and dicot species, and the host range of EMT is continuously expanding across a diverse range of crop species. In this protocol, we adapted a previously published account that describes the use of Arabidopsis thaliana roots to investigate the interaction of A. thaliana and Agrobacterium tumefaciens. In our laboratory, ...
[摘要] OV14;土壤传播的根瘤菌科的α-变形细菌强化了新型植物转化技术平台，称为“插入式”介导的转化（EMT）。 EMT可以稳定地转化单子叶植物和双子叶植物，并且EMT的宿主范围在不同范围的作物种类上不断扩大。在这个协议中，我们调整了一个以前发布的帐户，描述了使用拟南芥根系来研究 A的相互作用。 thaliana 和根癌土壤杆菌。在我们的实验室，我们通常使用 A。 thaliana 根外植体，以检查增强EMT效用的因素。此外，E-ART协议可用于研究E的转录反应。接种外植体组织后的寄主植物，宿主植物，不同的引物菌株/突变体的可变性以及测试A的易感性。作为破译支持EMT的机制的手段。【背景】推进“Ensifer”介导的转化（EMT）技术以成功地转化双子叶菊，即拟南芥，马铃薯Solanum tuberosum ，Nicotiana tabacum ，Manihot esculenta ，欧洲油菜和单子叶植物;之前曾报道过（Wendt等人，2012; Zuniga-Soto等人），2015; Chavarriaga-Aguirre et al。，2016; Rathore等人，2016）。另外，E的基因组分析。 （2014）发现，该细菌具有7.7Mb的基因组，其包含两条环状染色体（3.96Mb和2.01Mb）和两条质粒（1.61Mb和125Kb） ）。 ...
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