| Lentiviral Knockdown of Transcription Factor STAT1 in Peromyscus leucopus to Assess Its Role in the Restriction of Tick-borne Flaviviruses
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Cellular infection with tick-borne flaviviruses (TBFVs) results in activation of the interferon (IFN) signaling pathway and subsequent upregulation of numerous genes termed IFN stimulated genes (ISGs) (Schoggins et al., 2011). Many ISGs function to prevent virus pathogenesis by acting in a broad or specific manner through protein-protein interactions (Duggal and Emerman, 2012). The potency of the IFN signaling response determines the outcome of TBFV infection (Best, 2017; Carletti et al., 2017). Interestingly, data from our lab show that TBFV replication is significantly ...
[摘要] 蜱传黄热病病毒（TBFV）的细胞感染导致干扰素（IFN）信号传导途径的激活和随后称为IFN刺激基因（ISG）（Schoggins等人，2011）的众多基因的上调。许多ISG通过蛋白质 - 蛋白质相互作用以广泛或特定的方式起作用来防止病毒发病（Duggal和Emerman，2012）。 IFN信号反应的效力决定了TBFV感染的结果（Best，2016; Carletti等人，2017）。有趣的是，我们实验室的数据显示TBFV复制在储库物种Peromyscus leucopus的细胞中显着受到限制，从而表明有效的抗病毒应答（Izuogu等人，2017）。我们评估干扰素信号对抗性的相对贡献。通过敲低IFN反应途径中的主要转录因子来抑制白血病。信号转导和转录激活因子1（STAT1）是专门针对在P。 leucopus细胞通过shRNA技术。我们进一步测试了基因敲低对细胞对IFN反应和限制病毒复制的能力的影响;结果表明当STAT1表达被改变时，leucopus细胞对IFN刺激的反应降低，并且对TBFV复制显着更敏感。
【背景】IFN信号是抵抗侵入宿主细胞的黄病毒的第一道防线（Robertson等人，2009; Lazear和Diamond，2015）。通过模式识别受体（PRR）检测与病毒颗粒相关的分子标记，然后通过转录因子引发下游信号从细胞释放1型IFN（Kawai ...
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| Protocol for Enrichment of the Membrane Proteome of Mature Tomato Pollen
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] We established and elaborated on a method to enrich the membrane proteome of mature pollen from economically relevant crop using the example of Solanum lycopersicum (tomato). To isolate the pollen protein fraction enriched in membrane proteins, a high salt concentration (750 mM of sodium chloride) was used. The membrane protein-enriched fraction was then subjected to shotgun proteomics for identification of proteins, followed by in silico analysis to annotate and classify the detected proteins.
[摘要] 我们建立并阐述了利用番茄茄子（番茄）的例子丰富经济相关作物的成熟花粉膜蛋白质组的方法。为了分离富含膜蛋白质的花粉蛋白质级分，使用高盐浓度（750mM氯化钠）。然后将富含膜蛋白的级分进行霰弹枪蛋白质组学鉴定蛋白质，然后进行计算机分析，以对所检测的蛋白质进行注释和分类。
背景 由于蛋白质和溶质在不同细胞区室之间的适当分布或将新合成的蛋白质插入膜中很大程度上取决于膜蛋白质，所以膜蛋白质组是维持细胞和细胞器内稳态的核心（Paul等人 2013，2014和2016a）。考虑到膜蛋白的重要性，这些对于花粉功能和发育也是至关重要的（Paul等人，2016b）。许多全球花粉蛋白质组学研究已经在过去进行（Chaturvedi等人，2013和2016）;然而，很少讨论关于蛋白质的胞内分布和膜蛋白质组学在花粉中的组成的信息（Pertl et al。，2009）。一个原因可能是膜蛋白的低丰度和溶解度。在这里，我们描述了一种方法，用于分离和分析富含成熟花粉的膜蛋白的蛋白质级分，这是为番茄建立的（图1）。
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