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Date:
2017-06-20
[Abstract] α-glucosidases (including maltases and isomaltases) are enzymes which release glucose from a set of α-glucosidic substrates. Their catalytic activity, substrate specificity and thermostability can be assayed using this trait. Thermostability of proteins can also be determined using a high-throughput differential scanning fluorometry method, also named Thermofluor. We have shown that Thermofluor can also be applied to predict binding of substrates and inhibitors to a yeast α-glucosidase. The methods described here in detail were used in Viigand et al., 2016.
[摘要] α-葡糖苷酶（包括麦芽糖酶和异麦芽糖酶）是从一组α-葡糖苷底物释放葡萄糖的酶。 可以使用该特征来测定其催化活性，底物特异性和热稳定性。 蛋白质的热稳定性也可以使用高通量差示扫描荧光测定法（也称为Thermofluor）来测定。 我们已经表明，Thermofluor也可以应用于预测底物和抑制剂与酵母α-葡萄糖苷酶的结合。 这里详细描述的方法用于Viigand等人，2016。
【背景】麦芽糖酶（EC 3.2.1.20）和异麦芽糖酶（EC 3.2.1.10）是根据CAZy分类属于糖苷水解酶家族13的α-葡糖苷酶（Lombard等，2014）。甲基营养酵母多形汉酵母的麦芽糖酶MAL1是非选择性的，它将产生D-葡萄糖的麦芽糖和异麦芽糖状α-葡萄糖苷水解为反应产物之一。因此，麦芽糖酶对其底物的活性可以根据葡萄糖释放来确定。该工作描述的葡萄糖液色辅助方法可以快速方便地测定麦芽糖酶的活性，底物特异性和热稳定性。重要的是，这种基于活性的方法可以适用于产生葡萄糖作为反应产物的其它酶。高通量Thermofluor方法主要用于蛋白质晶体学测量（热）稳定性蛋白质（Boivin等，2013; Ericsson等，2006）。我们使用Thermofluor ...
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