Isolation, Culture and Differentiation of Adult Hippocampal Precursor Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] There are two neurogenic niches in the adult mammalian brain: the subventricular zone of the lateral ventricle and the subgranular zone of the hippocampal dentate gyrus. Cells from these areas can be isolated and maintained in vitro, using two different culture systems to assess their potential regarding proliferation and differentiation in a reductionist model. While the neurosphere assay is primarily performed to directly study the proliferative and differentiation potential of cells in individual brains, the monolayer culture allows single cell analysis in a rather homogeneous ...
[摘要] 成年哺乳动物脑中有两个神经生态位:侧脑室下脑室区和海马齿状回颗粒下区。 来自这些区域的细胞可以在体外分离和维持,使用两种不同的培养系统评估它们在还原模型中的增殖和分化的潜力。 虽然神经球测定主要是为了直接研究个体脑中细胞的增殖和分化潜能,单层培养允许在相当均匀的细胞群中进行单细胞分析。 在这里,我们描述了两个系统中的神经前体细胞的分离,培养方法和分化。
【背景】在哺乳动物脑中,成人神经干细胞存在于两个主要神经生态位中,即海马齿状回(DG)的下颗粒区(SGZ)和室下区(SVZ)的侧脑室,其允许新生神经元成人的大脑。来自神经生态位的神经前体细胞可以在体外分离和培养以模拟细胞过程,尤其是增殖和分化。两种标准培养系统,贴壁单层培养(Palmer等人,1995; Ray等人,1995)和神经球测定(Reynolds和Weiss,1992和1996 )在20世纪90年代被引入,代表了在体外研究神经祖细胞生物学的有价值的工具。
根据研究问题,每个系统都有其优点和缺点,在选择其中一种或另一种培养方法之前应该仔细考虑。在贴壁单层培养中,细胞生长相当孤立,形成更均匀的培养物。单层允许直接调查和监测单细胞水平的神经前体细胞。受控条件下的形态,增殖和分化等特征可以很容易地分析和可视化。然而,与神经球培养物相比,以单层培养的细胞代表更复杂的模型,因为细胞通常以更少的通常存在于细胞壁中的细胞 ...
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An ex vivo Perifusion Method for Quantitative Determination of Neuropeptide Release from Mouse Hypothalamic Explants
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] The hypothalamus is a primary brain area which, in mammals, regulates several physiological functions that are all related to maintaining general homeostasis, by linking the central nervous system (CNS) and the periphery. The hypothalamus itself can be considered an endocrine brain region of some sort as it hosts in its different nuclei several kinds of neuropeptide-producing and -secreting neurons. These neuropeptides have specific roles and participate in the regulation of homeostasis in general, which includes the regulation of energy metabolism, feeding behavior, water intake and body ...
[摘要] 下丘脑是一个主要的脑区域,在哺乳动物中,通过连接中枢神经系统(CNS)和周围环境来调节与维持一般体内平衡有关的几种生理功能。下丘脑本身可以被认为是某种类型的内分泌大脑区域,因为它在其不同的核中存在几种神经肽产生和分泌神经元。这些神经肽具有特定的作用并参与一般的体内平衡调节,其中包括调节能量代谢,摄食行为,进水量和身体核心温度。 如前所述,为了发挥其效果,必须产生这些肽,而且大部分是分泌的。在这种情况下,能够评估某些病症,疾病或治疗如何能够真正影响神经肽的分泌以及不同的神经肽能电路的功能是非常重要的。 评估这一点的一种方法是下丘脑外植体的渗透,然后定量收集的部分中的肽。 在这里,我们逐步解释如何在体外渗出下丘脑外植体中收集分数,其中可以从这些活的分离组织定量测定神经肽/神经激素释放。下丘脑渗出与其他现有测定相比有两大优点:(1)允许药理学操作来解剖下丘脑外植体中不同神经肽/神经激素释放的信号传导机制,以及(2)允许在多种下丘脑制剂上同时进行不同条件的实验,(3)据我们所知,这是允许研究神经肽分泌在基础条件下和用同样的下丘脑外植体反复刺激的唯一方法。 【背景】已经经常使用渗透研究胰岛功能。然而,该测定原则上适用于任何内分泌组织和任何肽或蛋白质分泌。 事实上,过去已经使用了不同的渗透系统,并且仍然是不同研究实验室在各种条件下研究下丘脑神经肽释放的有效程序。例如,Callewaere及其同事在2006年发表了一项研究,分析了趋化因子SDF-1(基质细胞衍生因子-1)对血管舒张素诱导的AVP(精氨酸 ...
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Spinal Cord Preparation from Adult Red-eared Turtles for Electrophysiological Recordings during Motor Activity
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Although it is known that the generation of movements is performed to a large extent in neuronal circuits located in the spinal cord, the involved mechanisms are still unclear. The turtle as a model system for investigating spinal motor activity has advantages, which far exceeds those of model systems using other animals. The high resistance to anoxia allows for investigation of the fully developed and adult spinal circuitry, as opposed to mammals, which are sensitive to anoxia and where using neonates are often required to remedy the problems. The turtle is mechanically stable and natural ...
[摘要] 虽然已知在位于脊髓的神经元回路中很大程度地进行运动的产生,但是所涉及的机制仍不清楚。乌龟作为调查脊柱运动活动的示范系统具有优势,远远超过使用其他动物的模型系统。对缺氧的高抗性允许对完全发育和成年脊髓电路进行调查,而不是对缺氧敏感的哺乳动物,并且通常需要使用新生儿来补救问题。乌龟是机械稳定的,天然感觉输入可以诱导多种复杂的运动行为,而不需要神经化学物质的应用。在这里,我们提供了如何使成年龟准备的详细方案,也称为电生理调查的综合准备。在这里,通过机械感觉激活,通过细胞内,细胞外和电图记录来记录单细胞和网络活性,可以诱导后肢刮擦反射。该准备工作是由Petersen等人(2014)和Petersen和Berg(2016)以及其他正在进行的研究开发的。 【背景】脊髓电生理学的研究传统上与机械并发症有关,因为许多运动部件和脊柱的灵活性。为了规避这个问题,脊髓经常从柱中解剖出来并移动到可以进行稳定的电生理记录的室。然而,该过程具有缺点,例如,如果要研究多个电动机行为,则适当激活电动机电路是复杂的。此外,缺乏供血和缺乏氧气对电路的健康和完整性有严重影响。一个可以规避所有这些问题的实验模型是龟制剂(Keifer and ...
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