| Single-cell qPCR Assay with Massively Parallel Microfluidic System
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] The single-cell transcriptome is the set of messenger RNA molecules expressed in one cell. It is extremely variable and changes according to external, physical and biochemical conditions. Due to sensitivity shortages, most of genetic studies use bulk samples, providing only the average gene expression. Single-cell technologies have provided a powerful approach to a more detailed understanding of the heterogenic populations and minority cells. However, since it is still a quite novel technique, standardized protocol has to be established. Single-cell qPCR, although partly limited by the number ...
[摘要] [摘要 ] 单细胞转录组是在一个细胞中表达的信使RNA分子的集合。它变化很大，并会根据外部，物理和生化条件而变化。由于敏感性不足，大多数基因研究使用大量样品，仅提供平均基因表达。单细胞技术提供了一种强大的方法，可以更详细地了解异质群体和少数细胞。然而，因为它仍然是一个相当新的技术，标准化协议具有至b e建立。尽管单细胞qPCR受基因数量的限制，但分析起来相对简单。因此，无需使用复杂的生物信息学分析就可以使用它。如本协议所述，单细胞qPCR的主要步骤包括单细胞分离，细胞裂解液，cDNA逆转录合成，cDNA库生成的扩增以及最终的定量聚合酶链反应。
[背景 ] 的单细胞转录是一套完整的在一个细胞中表达的信使RNA（mRNA）分子。它变化很大，并会根据外部，物理和生化条件而变化。因此，这是生物异质性的来源，其中来自相同环境的细胞与其他细胞相似但不相同。
由于灵敏度不足，大多数遗传研究使用大量样本，其中有数百至数千个细胞，仅提供平均基因表达。这极大地限制了少数细胞群体的研究，这可能会带来特定的特性，例如在癌症情况下的耐药性或转移能力。单细胞技术能够在单细胞水平上分析转录组，从而揭示了异源群体的复杂性。这些技术不仅应用于癌症，而且还应用于许多细胞生物学研究中，包括成年组织，干细胞，免疫细胞等。以及微生物学和病毒学等其他领域（Wen and ...
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| Tumorigenicity Assay in Nude Mice
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Tumorigenicity refers to the ability of cultured cells to develop viable tumors in immune-deficient animals. The goal of this protocol is to illustrate tumorigenicity assay by subcutaneous tumor-cell-transplantation in nude mice. Target cells are transplanted to 6-week-old nude mice subcutaneously and the tumor growth is monitored over a period of observation or treatment. When tumor grows to a pre-determined size or by the end of the limited period, the nude mice will be euthanatized and the xenograft will be removed for further examination.
[摘要] 致瘤性是指培养的细胞在免疫缺陷型动物中发展活肿瘤的能力。 该方案的目的是通过裸鼠皮下肿瘤细胞移植来说明致瘤性测定。 将靶细胞皮下移植到6周龄的裸鼠中，并在观察或治疗期间监测肿瘤生长。 当肿瘤生长至预定大小或在有限期结束时，裸鼠将被安乐死，异种移植物将被去除以进一步检查。
【背景】肿瘤发病率高，死亡率高，是导致死亡的主要原因之一，也是一个重大的公共卫生问题。 每年进行广泛的研究，以探索肿瘤发病机制和抗肿瘤治疗。 在癌症研究的过程中，裸鼠中的致瘤性测定是用于监测体内肿瘤生长的广泛使用的实验（Giovanella et al。，1974）。 用于致瘤性测定的最常用的动物系统是无胸腺裸鼠（Petricciani等人，1973），其中恶性细胞可以皮下或肾下 - 荚膜移植（van Meir，1997）。 对于具有相对低致瘤性能力的细胞，通过照射（30-60Gy）或植入Matrigel（Pretlow等人，1991）可以提高摄取率。 致瘤性测定提供了产生人细胞衍生的肿瘤组织用于测量肿瘤细胞恶性肿瘤和评价抗肿瘤药物功效的方法。
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| EAE Induction by Passive Transfer of MOG-specific CD4+ T Cells
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an animal model of multiple sclerosis (MS), which is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS). It is characterized by focal demyelination and inflammatory responses mediated by myelin-specific autoreactive CD4+ T cells. Using a passive transfer model of EAE in mice, we have demonstrated that regional specific neural signals by sensory-sympathetic communications create gateways for immune cells at specific blood vessels of the CNS, a phenomenon known as the gateway reflex (Arima et al., 2012; ...
[摘要] 实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是多发性硬化症（MS）的动物模型，其是中枢神经系统（CNS）的慢性炎性疾病。其特征在于由髓磷脂特异性自身反应性CD4 + T细胞介导的局灶性脱髓鞘和炎症反应。在小鼠中使用EAE的被动转移模型，我们已经证明，通过感觉交感通信的区域特异性神经信号在CNS的特定血管上产生免疫细胞的网关，这被称为网关反射（Arima等， ，2012; Tracey，2012; Arima等人，2013; Sabharwal等人，2014; Arima等人。 >，2015b）。在这里，我们描述了使用新鲜分离的（MOG）特异性CD4 + T细胞或周期性再刺激的MOG特异性CD4 + T细胞系的EAE的被动转移模型的方案，其是适用于体内追踪致病性CD4 T细胞，特别是CNS（Ogura等人，2008; Arima等人） 。，2012和2015b）。
【背景】广泛接受的是，自身反应性CD4 + T细胞在MS和EAE的发病机理中起重要作用（Reboldi，2009; International Multiple Sclerosis Genetics，et al。，2011; Steinman，2014），它们是CNS的慢性炎性疾病。 ...
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