| Isolation and High Throughput Flow Cytometric Apoptosis Assay of Human Neutrophils to Enable Compound Library Screening
|
|
Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] The study of human neutrophils in vitro is challenging due to their short half-life and propensity for activation. However, with careful handling and manipulation in the laboratory, they can be a powerful tool to investigate immune responses in health and disease. Here we describe a method for the isolation of human neutrophils from peripheral blood samples, followed by a high-throughput screen to assess the efficacy of a library of compounds in inducing neutrophil apoptosis, which may have therapeutic potential in neutrophil-driven diseases. This protocol is based on ...
[摘要] [摘要] 人类嗜中性粒细胞的研究 由于其半衰期短且易于活化，因此体外具有挑战性，然而，通过在实验室中的仔细处理和操纵，它们可以成为研究健康和疾病中免疫反应的有力工具。在此，我们介绍了一种分离方法外周血样本中的人类嗜中性粒细胞，然后进行高通量筛选，以评估化合物库诱导嗜中性粒细胞凋亡的功效，该化合物在嗜中性粒细胞驱动的疾病中可能具有治疗潜力。此规程基于先前发表的嗜中性粒细胞分离方法利用红细胞的葡聚糖沉降，接着用等离子体/粒细胞的分离的Percoll 〜1×10个的不连续梯度centrifugation.Yields 6 每嗜中性粒细胞毫升的血液，和>的纯度95个％嗜中性粒细胞是典型的。嗜中性粒细胞与经处理的激酶抑制剂文库，然后通过流式细胞仪评估中性粒细胞凋亡的速率。低通量用于高通量筛选人类原代免疫细胞，以鉴定具有修饰嗜中性粒细胞功能的化合物，并可根据需要进行修饰以评估其他表型。
[背景] 中性粒细胞是重要的先天免疫细胞与键的角色防御抵抗infection.They是短暂的细胞中，在感染和inflammat部位延长6-8小时循环典型的半衰期离子（萨默斯等人。 。，2010 ; Hidalgo。Et Al ...
|
|
|
| Analysis of 3D Cellular Organization of Fixed Plant Tissues Using a User-guided Platform for Image Segmentation
|
|
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] The advent of non-invasive, high-resolution microscopy imaging techniques and computational pipelines for high-throughput image processing has contributed to gain insights in plant organ morphogenesis at the cellular level. Confocal scanning laser microscopy (CSLM) allows the generation of three dimensional images constituted of serial optical sections reporting on stained subcellular structures. Fluorescent labels of cell walls or cell membranes, either chemically or through reporter proteins, are particularly useful for the analyses of tissue organization and cellular shapes in 3D. Image ...
[摘要] 非侵入性，高分辨率显微镜成像技术和高通量图像处理计算管道的出现有助于在细胞水平上获得植物器官形态发生的见解。共焦扫描激光显微镜（CSLM）允许产生由串联光学部件组成的三维图像，其报告染色的亚细胞结构。细胞壁或细胞膜的化学或通过报告蛋白的荧光标记对于3D中组织组织和细胞形状的分析特别有用。基于单元边界信号的图像分割被用作生成表示单元的3D段的输入。如果使用其他记录器，这些数字化3D对象提供有关细胞形状，大小，几何形状，位置或（细胞间）强度信号的定量数据。在这里，我们报告使用微观数据的图像分割的详细的注释工作流程。我们在拟南芥胚珠原基发育过程中对组织图案进行了研究。使用修改的假希夫碘化丙啶（mPS-PI）协议将整个心皮染色为细胞边界，通过CSLM以高分辨率获得3D图像，使用ImarisCell对单个细胞类型进行分段和注释。这允许与组织动力学研究相关的细胞形状和细胞数量的定量分析。
【背景】植物器官和组织动力学研究依赖于沿着发育进程的三维生长过程的分析。细胞数量，细胞大小和细胞形态的演变允许分别解释增殖，细胞扩增和各向异性的事件（Roeder等，2011; Barbier de Reuille等，2015; Bassel和Smith，2016; Coen和Rebocho， ...
|
|
|