| Using Light and Electron Microscopy to Estimate Structural Variation in Thylakoid Membranes
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] The shapes of chloroplasts and the architectures of internal thylakoid membranes are altered by growth and environmental changes (Lichtenthaler et al., 1981; Kutik, 1985; Terashima and Hikosaka, 1995). These morphological alterations proceed via transitional intermediates, during which dynamic and heterogeneous thylakoid membranes are observed in cells (Nozue et al., 2017). Light microscopy is useful for the detection of morphological differences in chloroplasts. The thylakoid architecture of such morphologically variable chloroplasts is confirmed by transmission electron ...
[摘要] 叶绿体的形状和内部类囊体膜的结构被生长和环境变化所改变（Lichtenthaler等，1981; Kutik，1985; Terashima和Hikosaka，1995）。 这些形态改变经由过渡中间体进行，在此期间在细胞中观察到动态和非均匀的类囊体膜（Nozue等人，2017）。 光学显微镜可用于检测叶绿体中的形态差异。 透射电子显微镜（TEM）证实了这种形态变化的叶绿体的类囊体结构。 描述了用光学显微镜结合电子显微镜监测结构变化的方法。
【背景】已经提出了超结构形态学与类囊体膜中的光合作用和代谢途径的功能性偶联（Oswald等人，2001）。 这是由类囊体膜在叶成熟期间和从营养期向开花生长期转变期间的异质性支持的。 形态改变有一定的时间滞后（Nozue等人，2017）。 类囊体膜的重排与叶绿体形状的变化同时发生，叶绿体的形状从具有典型的细长透镜状外观变为通过光学显微镜可识别的肿胀外观。
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| Freeze-fracture-etching Electron Microscopy for Facile Analysis of Yeast Ultrastructure
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] We describe a streamlined method that enables the quick observation of yeast ultrastructure by electron microscopy (EM). Yeast cells are high-pressure frozen, freeze-fractured to cut across the cytoplasm, and freeze-etched to sublimate ice in the cytosol and the organelle lumen. The cellular structures delineated by these procedures are coated by a thin layer of platinum and carbon deposited by vacuum evaporation, and this platinum–carbon layer, or replica, is observed by transmission EM. The method differs from the deep-etching of pre-extracted samples in that intact live cells are processed ...
[摘要] 我们描述了一种流线型的方法，可以通过电子显微镜（EM）快速观察酵母超微结构。 酵母细胞是高压冷冻的，冷冻破碎以跨细胞质切割，并冷冻蚀刻以升华胞质溶胶和细胞器腔内的冰。 通过这些方法描绘的细胞结构涂覆有通过真空蒸发沉积的铂和碳薄层，并且通过传输EM观察该铂 - 碳层或复制品。 该方法不同于预提取样品的深刻蚀，因为完整的活细胞在没有任何化学处理的情况下进行处理。 最突出的是观察到由不可获得的脂质酯制成的脂滴，但是可以容易地分析其他细胞器 - 细胞核，内质网，高尔基体，空泡，线粒体及其相互关系。 值得注意的是，从快速冷冻到EM观察的整个过程都可以在一天之内完成。
【背景】萌发酵母（Saccharomyces cerevisiae）可能是最常用的模型生物，应用各种各样的实验技术和复杂的全基因组数据库的存在大大促进了研究进展（Botstein和Fink，2011）。然而，由于其相对较小的尺寸和圆形，酵母的显微成像并不总是以令人满意的方式进行。细胞壁的存在对于常规电子显微镜（EM）尤其是一个问题，因为它妨碍样品制备中使用的试剂的渗透。快速冷冻酵母的冷冻替代EM目前被认为是超微结构观察的最佳方法（Giddings et al。，2001），但该方法存在缺点，即膜结构不清晰可见，有些细胞成分可能不被保留在有机溶剂中的取代过程中，该程序至少需要几天才能进行观察。
最近在固定相酵母中检查脂肪的研究中，我们使用冷冻断裂蚀刻来分析酵母超微结构（Tsuji ...
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| Stereotaxic Surgery for Suprachiasmatic Nucleus Lesions in Mice
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Site-specific lesions are invaluable methods for investigating the function of brain regions within the central nervous system and can be used to study neural mechanisms of behaviors. Precise stereotaxic surgery is required to lesion small regions of the brain such as the suprachiasmatic nucleus (SCN), which harbors the master circadian clock. In this protocol, we describe stereotaxic surgery optimized for bilateral lesion of the mouse SCN by loading electric current. Success of the SCN lesion is verified histologically and behaviorally by monitoring arrhythmic locomotor activity. The ...
[摘要] 位点特异性病变是调查中枢神经系统中脑区功能的有价值的方法，可用于研究神经行为机制。 需要精确的立体定位手术来对大脑的小区域进行损伤，例如含有主昼夜节律钟的视交叉上核（SCN）。 在本协议中，我们介绍了通过加载电流优化小鼠SCN双侧病变的立体定位手术。 通过监测心律失常运动活动，组织学和行为学验证了SCN病变的成功。 SCN损伤的小鼠允许评估主昼夜节律钟的消融的行为，生化和生理后果。
【背景】视交叉上核（SCN）是哺乳动物脑下丘脑内的一个小区域。它位于视交叉的两侧，包含约20,000个神经元。 SCN被称为主昼夜节律振荡器（时钟）的位置，并且与亮 - 暗循环同步所需。 SCN的消融是评估主昼夜节律钟的生理影响的有用策略。
与通过病毒注射或SCN特异性启动子的基因修饰相比，SCN的电解损伤具有能够快速和局部消除主昼夜节律钟的优点。通过Nissl染色手术后可以通过电脉冲定位病变，手术后一天可以开始监测活动节律。此外，通过施用化学物质的病变通常导致非特异性损伤，因此其不像电脉冲的损伤那样精确，特别是对于诸如SCN的小靶标。因此，该协议提供了一个有用的策略来评估主昼夜节律钟的效果（输出）。
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