| Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) Assay for Determination of Molecular Interactions in Living Cells
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] The bioluminescence resonance energy transfer (BRET) assay can be used as an indicator of molecular approximation and/or interaction. A significant resonance energy transfer signal is generated when the acceptor, having the appropriate spectral overlap with the donor emission, is approximated with the donor. In the example provided, proteins tagged with bioluminescent Renilla luciferase (Rlu) as donor and yellow fluorescent protein (YFP) as acceptor were co-expressed in cells. This pair of donor and acceptor have an approximate Förster distance of 4.4 nm, providing the optimal ...
[摘要] 生物发光共振能量转移（BRET）测定可以用作分子近似和/或相互作用的指标。 当具有与供体发射的适当光谱重叠的受体与供体近似时，产生显着的共振能量转移信号。 在所提供的例子中，用生物发光的海肾荧光素酶（Rlu）作为供体和作为受体的黄色荧光蛋白（YFP）标记的蛋白在细胞中共表达。 这对供体和受体具有4.4nm的近似Forster距离，提供了最佳的工作距离（Dacres et。，2010）。 这种技术可以用来探索在活细胞中发生的特定分子相互作用的时间过程。
【背景】使用生物发光供体和荧光受体的生物发光共振能量转移（BRET）研究可以监测在活细胞中实时发生的分子相互作用（例如标记的蛋白质，肽或小分子之间）。这种方法取决于供体和受体之间的空间近似，以及适当的光谱重叠以产生有意义的信号（图1）。目前提供的实例使用Rlu-标记的蛋白质作为供体和YFP-标记的蛋白质作为受体（Harikumar等人，2007）。这已被非常成功地应用于建立活细胞质膜中生理相关的蛋白质 - 蛋白质相互作用的存在。然而，重要的是包括可能导致非特异性蛋白质 - 蛋白质近似和能量转移（旁观者效应）的表达水平的对照，例如使用相似水平的已知非相关蛋白质的表达。此外，与未标记蛋白质的竞争可以帮助建立信号的相互作用的可饱和性和特异性。
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| Xenograft Mouse Model of Human Uveal Melanoma
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Uveal melanoma (UM) is a malignant intraocular tumor in adults. Metastasis develops in almost half of the patients and over 90% of the metastases are in the liver. With the advances in molecular targeting therapy for melanoma, a proper metastasis animal model is of increasing importance for testing the accuracy and effectiveness of systemic therapies. Here, we describe a xenograft model for mimicking human UM liver metastasis by injecting human UM cells into the vitreous cavity in nude mice. The athymic nude mice are immunocompromised and suitable for xenograft tumor growth and metastasis, ...
[摘要] 葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人中的恶性眼内肿瘤。 几乎一半的患者发生转移，90％以上的转移灶位于肝脏。 随着分子靶向治疗黑色素瘤的进展，正确的转移动物模型对于检测全身治疗的准确性和有效性越来越重要。 在这里，我们描述了一个模仿人类UM肝转移的异种移植模型，通过将人类UM细胞注入裸鼠的玻璃体腔中。 无胸腺裸鼠具有免疫功能低下，适合异种移植瘤的生长和转移，在双眼镜下，玻璃体内注射细胞更快，更容易手术，因此简单有效地检测人类的UM生长和转移。
【背景】UM是成人中最常见的原发性眼内肿瘤，发病率在世界范围内为5至10个/百万（Singh et al。，2011）。几乎一半的患者在初始诊断即使在治疗或/和移除原发性肿瘤后15年内也发生转移（Kujala等人，2003; Weis等人， 2016）。在超过4％的患者中，诊断时已经存在微转移（Finger等人，2005）。这个数字可能会被低估，因为早期的UM检测的限制。目前的药物治疗，例如眼球摘除术，斑块近距离放疗，质子束照射已经成功地去除或抑制早期的局灶性眼内UMs（Dogrusoz等人，2017）。但是一般来说，UM对标准的化学疗法具有抗性，迄今为止还没有有效的全身治疗可用于转移性病变（Goh和Layton，2016; ...
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| Qualitative and Quantitative Assay for Detection of Circulating Autoantibodies against Human Aortic Antigen
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Increased amount of autoantibodies in human sera are the hallmark of autoimmune diseases (Wang et al., 2015). In case of known antigen, detection of autoantibodies is done using laboratory based methods. However, in most autoimmune diseases, knowledge of self-antigen is still vague. We have developed an ELISA-based quantitative assay to detect the presence of autoantibodies as well as to measure the circulating autoantibodies in the sera of patients suffering from large vessel vasculitis (LVV), an autoimmune disease (Chakravarti et al., 2015). Using this assay, we detected ...
[摘要] 人血清中自身抗体量的增加是自身免疫性疾病的标志（Wang等人，2015）。 在已知抗原的情况下，使用基于实验室的方法检测自身抗体。 然而，在大多数自身免疫性疾病中，自身抗原的知识仍然是模糊的。 我们已经开发了基于ELISA的定量测定法来检测自身抗体的存在以及测量患有大血管血管炎（LVV），自身免疫疾病（Chakravarti等人）的患者的血清中的循环自身抗体， ，2015）。 使用该测定，我们检测到LVV患者血清中抗主动脉抗体的增加。 我们通过独立生物化学技术进一步验证了结果，发现特异度 94％（Chakravarti等人，2015）。 该方法可以被独特地修改以适应任何自身免疫，特别是器官特异性疾病，因此在自身抗体的检测和定量中具有更广泛的应用。
【背景】约有80-100种自身免疫性疾病，其中免疫细胞将自身蛋白识别为外源抗原，并被激活以产生体液应答。尽管大多数自身免疫性疾病的触发因素仍然是一个谜，患者血清中存在较高水平的抗体是非常普遍的（Wang等人，2015）。一些实例包括抗小血管血管炎中的嗜中性粒细胞胞浆抗原，多发性硬化中的髓磷脂碱性蛋白，1型糖尿病中的谷氨酸脱羧酶等。（Wang等人， ...
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