| Two Different Methods of Quantification of Oxidized Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD+) and Reduced Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NADH) Intracellular Levels: Enzymatic Coupled Cycling Assay and Ultra-performance Liquid Chromatography (UPLC)-Mass Spectrometry
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Current studies on the age-related development of metabolic dysfunction and frailty are each day in more evidence. It is known, as aging progresses, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) levels decrease in an expected physiological process. Recent studies have shown that a reduction in NAD+ is a key factor for the development of age-associated metabolic decline. Increased NAD+ levels in vivo results in activation of pro-longevity and health span-related factors. Also, it improves several physiological and metabolic parameters of aging, including ...
[摘要] 目前关于代谢功能障碍和虚弱的年龄相关发展的研究每天都有更多的证据。众所周知，随着衰老的进展，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD + ）水平在预期的生理过程中降低。最近的研究表明，NAD + 的减少是与年龄相关的代谢衰退发展的关键因素。增加NAD + 水平体内导致激活寿命和健康跨度相关因素。此外，它改善了老化的几个生理和代谢参数，包括自然和加速老化的小鼠模型中的肌肉功能，运动能力，葡萄糖耐量和心脏功能。
鉴于监测细胞NAD + 和NADH水平的重要性，有一个值得信赖的方法是至关重要的。该方案的目的是在有效且广泛适用的测定中描述来自组织和细胞的NAD + 和NADH提取以及其图形和定量分析。
【背景】氧化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD + 和NADH）是重要的生物辅助因子，它们在几种合成代谢和分解代谢功能中提供和接受电子。它们参与诸如糖酵解，三羧酸循环和氧化磷酸化的反应。此外，它还作为DNA损伤修复中涉及的几种酶的底物，例如sirtuins和poly（ADP-核糖）聚合酶（PARP）（Imai和Guarente，2014; Verdin，2015; Yoshino et al。 ，2018）。
NAD + ...
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| A Modified Chromogenic Assay for Determination of the Ratio of Free Intracellular NAD+/NADH in Streptococcus mutans
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Author:
Date:
2016-08-20
[Abstract] Nicotinamide adenine dinucleotide is a coenzyme present in all kingdoms of life and exists in two forms: oxidized (NAD+) and reduced (NADH). NAD(H) is involved in a multitude of essential metabolic redox reactions, providing oxidizing or reducing equivalents. The ratio of free intracellular NAD+/NADH is fundamentally important in the maintenance of cellular redox homeostasis (Ying, 2008). Various chromogenic cycling assays have been used to determine the ratio of NAD+/NADH in both bacterial and mammalian cells for more than forty years (Bernofsky and Swan, ...
[摘要] 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是存在于生命的所有王国中的辅酶，并且以两种形式存在：氧化（NAD +）和还原（NADH）。 NAD（H）参与多种必需的代谢氧化还原反应，提供氧化或还原等价物。游离细胞内NAD + /NADH的比率在维持细胞氧化还原稳态中是根本重要的（Ying，2008）。已经使用各种显色循环测定来测定细菌和哺乳动物细胞中NAD +/NAD +/NADH的比率超过四十年（Bernofsky和Swan，1973; Nisselbaum和Green，1969）。 /> 在这里，我们详细描述了测定变异链球菌中游离细胞内NAD + 与NADH的比率的测定法。该循环测定是Bernofsky和Swan（Bernofsky和Swan，1973）首先描述的方案的修改版本，使用Frezza等人描述的提取缓冲液。 （2011），随后是由Gibbon和Larher描述的减少的MTT降水（Gibon和Larher，1997）。如图1所示，使用乙醇脱氢酶来驱动一系列氧化还原反应，利用来自样品提取物的外源添加的乙醇和NAD +作为初始底物，吩嗪乙硫酸盐（PES）作为电子载体，以及噻唑基蓝色四唑溴化物（MTT）作为末端电子受体。使用6M ...
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