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20 µl pipette tips

公司名称: SARSTEDT
产品编号: 70.1116
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Ex vivo Assessment of Mitochondrial Function in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using XF Analyzer
Author:
Date:
2021-04-05
[Abstract]  

Cellular health and function, as we know today, depend on a large extent on mitochondrial function. The essential function of mitochondria is the energy production, more precisely ATP production, via oxidative phosphorylation. Mitochondrial energy production parameters therefore represent important biomarkers. Studies on human cells have mainly been performed on in vitro cell cultures. However, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are particularly suitable for such examinations. That’s why this protocol describes a method to measure key parameters of mitochondrial function in

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[摘要]  [摘要]正如我们今天所知,细胞的健康和功能在很大程度上取决于线粒体的功能。线粒体的基本功能是ENER GY生产,更精确的LY ATP生产,通过氧化磷酸化。因此,线粒体能量产生参数代表重要的生物标记。对人类细胞的研究主要是在体外细胞培养中进行的。然而,外周血单核细胞(PBMC)是特别升ý适于这样的检查。这就是为什么这个协议描述测量与最新的技术,新鲜分离的PBMC线粒体功能的关键参数的方法的XF分析。对于这个离体PBMC首先是从人抗凝血液中分离出来的。接下来,将它们附着到预先涂有Poly-D-Lysine的特殊微孔板的表面上。期间的氧消耗速率(OCR)以及细胞外酸化率(ECAR)的应力试剂寡,羰氰化物随后的测量4 - (三氟甲氧基)苯腙(FCCP),鱼藤酮和抗霉素A被注入。可以从获得的结果中计算出几个线粒体参数。该协议的应用允许分析对人体细胞的各种影响,例如药物或环境因素。


[背景]线粒体在维持正常细胞功能中起关键作用。现在众所周知,它们不仅通过氧化磷酸化产生ATP,而且还参与氨基酸,脂质和核苷酸的代谢,潜水信号转导和氧化还原过程以及质量控制和降解过程,包括线粒体和磷酸化。细胞凋亡(Pfanner等,2019)。然而,线粒体代表正常细胞中ATP合成的主要位点(Akbari等人,2019)。为此,通过多亚基酶复合物I – ...

Generation of Targeted Knockout Mutants in Arabidopsis thaliana Using CRISPR/Cas9
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract]  The CRISPR/Cas9 system has emerged as a powerful tool for gene editing in plants and beyond. We have developed a plant vector system for targeted Cas9-dependent mutagenesis of genes in up to two different target sites in Arabidopsis thaliana. This protocol describes a simple 1-week cloning procedure for a single T-DNA vector containing the genes for Cas9 and sgRNAs, as well as the detection of induced mutations in planta. The procedure can likely be adapted for other transformable plant species. [摘要]  CRISPR / Cas9系统已成为植物及其以外基因编辑的强大工具。 我们已经开发了植物载体系统,用于拟南芥中多达两个不同靶位点的基因的目标Cas9依赖性诱变。 该方案描述了对于含有Cas9和sgRNA的基因的单个T-DNA载体的简单的1周克隆程序,以及植物中诱导突变的检测。 该方法可能适用于其他可转化植物物种。
【背景】CRISPR / Cas9系统(Cas9)提供了一种简单且广泛适用的方法来修改感兴趣的基因组区域,因此成为植物和其他生物体基因组编辑的首选工具(Schiml和Puchta,2016)。该系统依赖于可以通过短的人造单指导RNA分子(sgRNA)向基因组DNA序列引导的化脓性链球菌(Cas9)的细菌Cas9核酸酶(Jinek等人, ,2012),在那里它创建一个双链断裂(DSB)。然后通过植物细胞的固有DNA修复机制修复这些DSB。在这里,可以区分两个主要途径(Salomon和Puchta,1998)。 (i)与DSB位点高度同源的DNA分子可用作修复模板。可以利用这种同源性定向修复(HDR)方法在DSB的现场引入特定的序列(Schiml等人,2014; Baltes and Voytas,2015)。然而,由于这些序列的低融合率,植物中HDR介导的基因编辑仍然具有挑战性。 ...

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