| CRISPR/Cas9-mediated ssDNA Recombineering in Corynebacterium glutamicum
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Corynebacterium glutamicum is a versatile workhorse for industrial bioproduction of many kinds of chemicals and fuels, notably amino acids. Development of advanced genetic engineering tools is urgently demanded for systems metabolic engineering of C. glutamicum. Recently unveiled clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) and their CRISPR-associated proteins (Cas) are now revolutionizing genome editing. The CRISPR/Cas9 system from Streptococcus pyogenes that utilizes NGG as protospacer adjacent motif (PAM) and has good targeting specificity ...
[摘要] 谷氨酸棒杆菌是多种化学品和燃料，特别是氨基酸的工业生物生产的多功能工具。 迫切需要开发先进的基因工程工具用于 C的系统代谢工程。谷氨酸。 最近推出的聚集的有规律的间隔短回文重复序列（CRISPR）和它们的CRISPR相关蛋白（Cas）现在正在彻底改变基因组编辑。 来自 Streptococcus pyogenes 的CRISPR / Cas9系统利用NGG作为原型间隔区相邻基序（PAM）并具有良好的靶向特异性，可以开发成为 C的高效和精确基因组编辑的有力工具。谷氨酸。 在该方案中，我们描述了 C中CRISPR / Cas9介导的ssDNA重组工程的一般程序。谷氨酸。 可以在 C中引入小的修改。 谷氨酸染色体，编辑效率高达90％。
【背景】革兰氏阳性土壤细菌 Corynebacterium glutamicum 是用于氨基酸，生物燃料和聚合物构建模块的工业生物生产的多功能工具（Becker et al。，2016）。在 C工程的早期阶段。谷氨酸，随机诱变结合对氨基酸类似物的表型抗性的阳性选择是最常用的策略（Vertes et al。，2005）。 C中的遗传操作。谷氨酸（glutamicum）于1984年启动，并成为菌株改良的关键促成策略（Ozaki et al。，1984）。常规使用的基因破坏和插入 ...
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| Assays for Oxidative Responses of Fusarium graminearum Strains to Superoxide Radicals
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] The ascomycete fungus Fusarium graminearum is a major causal agent of Fusarium head blight (FHB), a devastating disease affecting small grains cereals worldwide. To better understand the pathogenesis of this fungus, we provide here an easy-to-use protocol to examine the sensitivity of the wild-type and mutant strains of F. graminearum to oxidative stress from superoxide anions (O2•-) generated by menadione. Similarly, this assay can also be used to detect other stress responses of different fungal strains to various stress agents. The change in stress ...
[摘要] 子囊菌真菌 Fusarium graminearum 是 Fusarium 头枯病（FHB）的主要致病因子，FHB是一种影响全世界小粒谷物的破坏性疾病。 为了更好地了解这种真菌的发病机理，我们在此提供了一种易于使用的方案来检测 F的野生型和突变株的敏感性。 禾谷镰刀菌对由甲萘醌产生的超氧阴离子（O2 • - ）的氧化应激。 类似地，该测定也可用于检测不同真菌菌株对各种应激物的其他应激反应。 突变体的应激反应的变化可以为突变基因的生物学功能提供线索。
【背景】子囊菌真菌 Fusarium graminearum （以前也被称为 Gibberella zeae 的性状）不仅是 Fusarium 头枯病和幼苗的主要致病因子小麦和大麦枯萎病，也是玉米赤霉病茎腐病的重要致病因子之一（Dal Bello et al。，2002; Bai and Shaner，2004; Kazan et al。，2012）。除了导致谷物大量减产外，这种真菌还会产生影响人类和动物健康的真菌毒素。因此，这种真菌受到广泛关注，在所有研究的植物病原真菌中排名第四（Dean et al。，2012）。
F。禾本科植物对死有机物进行过冬，特别是对受感染的小粒和玉米作物残留物进行过度研究。为了在如此广泛的环境中生存， F. graminearum ...
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| Enzymatic Activity Assay for Invertase in Synechocystis Cells
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Invertase can catalyze the hydrolysis of sucrose, and is widely distributed in cells of cyanobacteria and plants. Being responsible for the first step for sucrose metabolism, invertase plays important physiological roles and its enzymatic activity is frequently needed to be determined. All the methods for determination of the invertase activity are dependent on detection of the glucose product generated by the invertase. Here we describe an ion chromatography based protocol of our laboratory for determination of cyanobacterial intracellular invertase activity.
[摘要] 转化酶可催化蔗糖的水解，广泛分布于蓝细菌和植物细胞中。 负责蔗糖代谢的第一步，转化酶起着重要的生理作用，其酶活性经常需要确定。 所有测定转化酶活性的方法都依赖于转化酶产生的葡萄糖产物的检测。 在这里我们描述了我们的实验室用于测定蓝细菌细胞内转化酶活性的基于离子色谱的方案。
【背景】转化酶和蔗糖在蓝细菌中发挥重要的生理作用（Curatti，et al。，2008; Kolman等人，2015）和高等植物（Vargas等人， ，2003; Vargas et。，2010）。转化酶（EC 3.2.1.26）可以催化蔗糖降解成葡萄糖和果糖。由于转化酶的这种特性，任何可用于测定葡萄糖或果糖的方法理论上都将用于转化酶酶活性测定。实际上，大多数转化酶酶活性测定基于检测产生的葡萄糖产物。
一些公司已经开发了用于转化酶活性测定的几种试剂盒，例如来自abcam（USA）的ab197005，来自Novus Biologicals（USA）的KA1629，来自Sigma-Aldrich（USA）的MAK118。通过使用这些试剂盒，由转化酶反应产生的葡萄糖产物将被氧化并通过比色（570nm）或荧光法（λem/ ex = 585 / ...
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