| Long-term in vitro Culture of Cryptosporidium parvum
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Continuous in vitro growth of Cryptosporidium parvum has proved difficult and conventional in vitro culture techniques result in short-term (2-5 days) growth of the parasite resulting in thin-walled oocysts that fail to propagate using in vitro cultures, and do not produce an active infection using immunosuppressed or immunodeficient mouse models (Arrowood, 2002). Here we describe the use of hollow fiber bioreactors (HFB) that simulate in vivo conditions by providing oxygen and nutrients to host intestinal cells from the basal surface and permit ...
[摘要] Cryptosporidium parvum 的连续体外生长已证明是困难的，并且常规体外培养技术导致短期（2-5天）生长寄生虫导致薄壁卵囊不能使用体外培养物繁殖，并且不使用免疫抑制或免疫缺陷小鼠模型产生活跃感染（Arrowood，2002）。在这里，我们描述了中空纤维生物反应器（HFB）的使用，通过提供氧气和营养物质从基础表面宿主肠细胞模拟体内条件，并允许建立低氧化还原，高营养环境顶面。当接种10 5 C时。 parvum （爱荷华州分离物）卵囊生物反应器在14天后每ml产生10个 8 卵囊（20ml额外毛细血管体积），并保持2年以上。使用TCR-α免疫缺陷小鼠模型的体内感染性研究显示，在6,12和18个月时从生物反应器产生的卵囊与用于启动培养的亲本Iowa分离物无法区分。 HFB产生的卵囊具有与亲本爱荷华分离物类似的百分比分析。
【背景】 Cryptosporidium parvum 是人和其他哺乳动物肠道的细胞内专性寄生虫，导致急性腹泻。该疾病在免疫功能正常的个体中是自限性的，然而，在免疫功能低下的成人和幼儿中，该疾病可能危及生命（Kotloff，2017）。它是经济资源低的国家中三种被诊断出的儿童肠道疾病之一（Kotloff et al。，2013; Sow et ...
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| Conditional Knockdown of Proteins Using Auxin-inducible Degron (AID) Fusions in Toxoplasma gondii
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Toxoplasma gondii is a member of the deadly phylum of protozoan parasites called Apicomplexa. As a model apicomplexan, there is a great wealth of information regarding T. gondii’s 8,000+ protein coding genes including sequence variation, expression, and relative contribution to parasite fitness. However, new tools are needed to functionally investigate hundreds of putative essential protein coding genes. Accordingly, we recently implemented the auxin-inducible degron (AID) system for studying essential proteins in T. gondii. Here we provide a step-by-step protocol ...
[摘要] 弓形虫是原生动物寄生虫称为Apicomplexa致命门的一员。 作为一个复杂的模型，关于T的信息有很多。 gondii的8,000多种蛋白质编码基因，包括序列变异，表达和对寄生虫适应的相对贡献。 然而，需要新的工具来功能性地调查数百个推定的必需蛋白质编码基因。 因此，我们最近实施了生长素诱导降解（AID）系统来研究T中的基本蛋白质。弓形虫。 在这里，我们提供了一个检查蛋白质功能的一步一步的协议。 在组织培养环境中使用AID系统。
【背景】生长素是一类通过靶向某些蛋白质在植物中进行蛋白酶体降解而发出信号的植物激素（Teale等人，2006）。 Kohei Nishimura等人具有将该植物特异性信号传导系统的组分转移到其他真核生物中用于有兴趣的蛋白质（POI）的条件调节，创建生长素诱导降解（AID）系统的聪明想法（Nishimura等人，2009）。这个系统已经被成功地用于几种真核生物，包括疟原虫疟原虫（Kreidenweiss et al。，2013; Philip和Waters，2015）。只需要两个转基因成分来实现这个系统，称为转运抑制剂反应1（TIR1）的植物生长素受体和用AID标记的POI。用生长素（例如，3-吲哚乙酸/ IAA）处理活化SCF ...
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| Determination of Reduced and Total Glutathione Content in Extremophilic Microalga Galdieria phlegrea
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Glutathione is an important molecule involved in the primary and secondary metabolism of all organisms. The Glutathione redox status is an indicator of the cellular redox state. Therefore, it is important to have precise methods on hand to determine the glutathione redox status in the cell. In this protocol, we describe an improved spectrophotometric method to estimate the content of reduced (GSH) and oxidized (GSSG) forms of glutathione in the extremophilic microalga Galdieria phlegrea.
[摘要] 谷胱甘肽是涉及所有生物体的初级和次级代谢的重要分子。 谷胱甘肽氧化还原状态是细胞氧化还原状态的指标。 因此，重要的是要有精确的方法来确定细胞中的谷胱甘肽氧化还原状态。 在本协议中，我们描述了一种改进的分光光度法，用于估计极地微藻Galdieria phlegrea中还原（GSH）和氧化（GSSG）形式的谷胱甘肽的含量。
【背景】谷胱甘肽（γ-L-谷氨酰基-L-半胱氨酰 - 甘氨酸）是存在于所有已知生物体中的必需三肽，其范围从细菌到人类（Frendo等人，2013）。它涉及到几种不同的细胞保护作用（图1）。谷胱甘肽被认为是具有氧化还原信号功能的优异的抗氧化分子。它还参与对非生物和生物胁迫的反应，并涉及细胞的初级代谢（C，N，S代谢）（Noctor et al。，2012;Hernándezet al。 ，2015; Salbitani等人，2015）。
＆NBSP;在植物细胞中，还原型和氧化形式的谷胱甘肽（GSH / GSSG）之间的比例在信号传导和许多防御机制的激活中起重要作用（Foyer和Noctor，2012; Salbitani等人， ，2015）。通常严格控制的GSH / GSSG氧化还原状态可能在应力条件下瞬时转向稍微氧化的值（Tausz等人，2004）。
＆NBSP;在过去，一些研究人员已经开发和修改了分光光度法来确定几种生物体中的GSH和GSSG（Anderson，1985; ...
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