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Glycine, Biotechnology Grade

公司名称: AMRESCO
产品编号: 0167
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RNA Cap Methyltransferase Activity Assay
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract]  Methyltransferases that methylate the guanine-N7 position of the mRNA 5’ cap structure are ubiquitous among eukaryotes and commonly encoded by viruses. Here we provide a detailed protocol for the biochemical analysis of RNA cap methyltransferase activity of biological samples. This assay involves incubation of cap-methyltransferase-containing samples with a [32P]G-capped RNA substrate and S-adenosylmethionine (SAM) to produce RNAs with N7-methylated caps. The extent of cap methylation is then determined by P1 nuclease digestion, thin-layer chromatography (TLC), and phosphorimaging. ... [摘要]  甲基化mRNA 5'帽结构的鸟嘌呤-N7位置的甲基转移酶在真核生物中普遍存在并且通常由病毒编码。这里我们提供生物样品的RNA帽甲基转移酶活性的生化分析的详细方案。该测定包括将含有帽 - 甲基转移酶的样品与[32 P] G-加帽的RNA底物和S-腺苷甲硫氨酸(SAM)温育以产生具有N7-甲基化帽的RNA。然后通过P1核酸酶消化,薄层色谱(TLC)和磷成像确定帽甲基化的程度。此处描述的方案包括用于产生[32 P] G-加帽的RNA底物和用于从哺乳动物细胞制备核和细胞质提取物的附加步骤。该分析也适用于分析其他生物样品(包括重组蛋白制剂和来自分析分离和免疫沉淀/下拉实验的级分)的帽甲基转移酶活性。

【背景】mRNA的5'端的N7-甲基鸟苷帽是适当的真核mRNA加工,定位和翻译所必需的修饰。 ...

Separation of Plant 6-Phosphogluconate Dehydrogenase (6PGDH) Isoforms by Non-denaturing Gel Electrophoresis
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract]  6-Phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH; EC 1.1.1.44) catalyzes the third and irreversible reaction of the pentose phosphate pathway (PPP). It carries out the oxidative decarboxylation of the 6-phosphogluconate to yield ribulose-5-phosphate, carbon dioxide and NADPH. In higher plants, 6PGDH has several subcellular localizations including cytosol, chloroplast, mitochondria and peroxisomes (Corpas et al., 1998; Krepinsky et al., 2001; Mateos et al., 2009; Fernández-Fernández and Corpas, 2016; Hölscher et al., 2016). Using Arabidopsis thaliana as ... [摘要]  6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH; EC 1.1.1.44)催化戊糖磷酸途径(PPP)的第三次和不可逆反应。它进行6-磷酸葡萄糖酸盐的氧化脱羧,得到核酮糖-5-磷酸,二氧化碳和NADPH。在高等植物中,6PGDH具有几种亚细胞定位,包括细胞质,叶绿体,线粒体和过氧化物酶体(Corpas et al。,1998; Krepinsky等人,2001; Mateos et al。,2009;Fernández-Fernándezand Corpas,2016;Hölscher等人,2016)。使用拟南芥作为植物模型和甜椒(Capsicum annuum L.)作为具有农业兴趣的植物的水果,该方案说明如何制备植物提取物用于分离通过在6%聚丙烯酰胺非变性凝胶上电泳可能的6PGDH同种型。因此,该方法允许检测在拟南芥幼苗中的三种6PGDH同种型和甜椒果实中的两种6PGDH同种型。
【背景】非变性凝胶电泳是一种强大的技术,可以分离天然蛋白质。 它们的移动性取决于蛋白质的大小,形状和净电荷。 在这些分析条件下,蛋白质保留了其活性,并结合特定的染色方法,可以分离潜在同种型的存在。 在超氧化物歧化酶家族的情况下,广泛应用这种方法。 然而,据我们所知,没有多少论文分析植物组织中6PGDH活性的不同同工型的存在(Corpas等人,1998; Mateos等人。 ,2009)。 ...

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