| Microbial Mutagenicity Assay: Ames Test
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The Microbial mutagenicity Ames test is a bacterial bioassay accomplished in vitro to evaluate the mutagenicity of various environmental carcinogens and toxins. While Ames test is used to identify the revert mutations which are present in strains, it can also be used to detect the mutagenicity of environmental samples such as drugs, dyes, reagents, cosmetics, waste water, pesticides and other substances which are easily solubilized in a liquid suspension. We present the protocol for conducting Ames test in the laboratory.
[摘要] 微生物致突变性艾姆斯试验是一种细菌生物测定法，用于体外评估各种环境致癌物和毒素的致突变性。 虽然艾姆斯试验可用于鉴定菌株中存在的回复突变，但它也可用于检测环境样品如药物，染料，试剂，化妆品，废水，农药和易溶于水的其他物质的致突变性 液体悬浮液。 我们提供在实验室进行艾姆斯测试的协议。
【背景】微生物艾姆斯试验是一种简单，快速和强大的细菌试验，由不同的菌株和鼠伤寒沙门氏菌/ E的应用组成。用于确定致突变潜力（Levin等人，1982; Gupta等人，2009）。 1975年，艾姆斯和他的追随者对传统的艾姆斯检测方案进行了标准化，并于20世纪80年代进行了再次评估（Maron and Ames，1983）。替换已有突变的新突变的诱导允许恢复基因功能。新形成的突变细胞允许在没有组氨酸的情况下生长并形成菌落，因此该测试也被称为“逆转测定法”（Ames，1971）。虽然传统的艾姆斯测试对于初始监测致突变化合物来说非常费力且费时，但是通过使其更便利，液体悬浮液的小型化显着地影响了可用性。标准剂量（2μl，5μl，10μl，50μl和100μl）用于评估从低浓度到高浓度的致突变性（Hayes，1982）。小鼠肝脏已被用作制备匀浆9,000xg（S9肝脏级分）的组织，而在 ...
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| A Protocol of Using White/Red Color Assay to Measure Amyloid-induced Oxidative Stress in Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The yeast Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) harboring ade1 or ade2 mutations manifest red colony color phenotype on rich yeast medium YPD. In these mutants, intermediate metabolites of adenine biosynthesis pathway are accumulated. Accumulated intermediates, in the presence of reduced glutathione, are transported to the vacuoles, whereupon the development of the red color phenotype occurs. Here, we describe a method to score for presence of oxidative stress upon expression of amyloid-like proteins that would convert the red phenotype of ade1/ade2 ...
[摘要] 携带 ade1 或 ade2 突变体的酵母酿酒酵母（ S。cerevisiae ）在富酵母上显示红色菌落色表型 中等YPD。 在这些突变体中，积累了腺嘌呤生物合成途径的中间代谢物。 在还原型谷胱甘肽存在下，累积的中间体被转移到空泡中，由此发生红色表型的发生。 在这里，我们描述了一种通过淀粉样样蛋白的表达来评估氧化应激存在的方法，其将将ade1 / ade2突变体酵母的红色表型转化为白色。 该测定可能是用于筛选具有抗淀粉样蛋白聚集或抗氧化应激效力的药物的有用工具。
【背景】ADE1或ADE2基因的酵母（Saccharomyces cerevisiae）突变体（例如，，ade1Δ，ade2Δ ade1-14 ade2-），当在YPD（酵母蛋白胨葡萄糖）培养基上生长时，作为腺嘌呤生物合成途径的中间代谢物的液泡（Sharma等人，2003）。包含早熟终止密码子的可抑制等位基因ade1-14 已被广泛用于评价翻译的朊病毒状态终止因子Sup35蛋白。在[ psi - ]酵母中，Sup35p保持可溶性和功能性，因此翻译在有效地终止于ade1-14的早熟终止密码子>等位基因导致截短和非功能性Ade1蛋白的合成。因此，腺嘌呤生物合成级联保持不完整，导致中间体代谢产物的积累，产生酵母的红色表型。相比之下，在[PSI + ...
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| Xanthoferrin Siderophore Estimation from the Cell-free Culture Supernatants of Different Xanthomonas Strains by HPLC
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Xanthomonads can scavenge iron from the extracellular environment by secreting the siderophores, which are synthesized by the proteins encoded by xss (Xanthomonas siderophore synthesis) gene cluster. The siderophore production varies among xanthomonads in response to a limited supply of iron where Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) produces less siderophores than Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) and Xanthomonas oryzae pv. oryzicola (Xoc). Siderophore production can be measured by HPLC and with the CAS (Chrome azurol ...
[摘要] 黄单胞菌属可以通过分泌铁载体来从细胞外环境中清除铁，这些铁载体由由xss 编码的蛋白质（anthomonas 基因簇。 由于Xanthomonas campestris pv的铁供应有限，铁载体生产因黄托曼德而异。 野蓟菊（Xcc）产生比黄单胞菌（Xanthomonas oryzae）pv更少的铁载体。 米曲霉（Xoo）和黄单胞菌Xanthomonas oryzae pv。 oryzicola（Xoc）。 铁载体生产可以通过HPLC和CAS测量（ Chrome azurol S ）标准板测定，然而HPLC是在Xanthomonads中用于铁氰菊酯定量的CAS-琼脂平板测定的更准确的方法。 在这里我们描述如何使用高效液相色谱来量化黄单胞菌中的铁载体。
【背景】细菌植物病原体 Xanthomonas 具有（α-羟基羧酸盐型铁载体;类似于弧菌铁蛋白）和编码参与铁载体介导的铁吸收的外膜受体（Pandey和Sonti）所需的操纵子，2010; ...
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