| Dual-sided Voltage-sensitive Dye Imaging of Leech Ganglia
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] In this protocol, we introduce an effective method for voltage-sensitive dye (VSD) loading and imaging of leech ganglia as used in Tomina and Wagenaar (2017). Dissection and dye loading procedures are the most critical steps toward successful whole-ganglion VSD imaging. The former entails the removal of the sheath that covers neurons in the segmental ganglion of the leech, which is required for successful dye loading. The latter entails gently flowing a new generation VSD, VF2.1(OMe).H, onto both sides of the ganglion simultaneously using a pair of peristaltic pumps. We expect the described ...
[摘要] 在这个协议中，我们介绍了一种有效的方法，用于Tomina和Wagenaar（2017）中使用的电压敏感染料（VSD）加载和水蛭神经节成像。 解剖和染料加载程序是成功完成全神经节VSD成像的关键步骤。 前者需要去除覆盖水蛭节段神经节神经元的鞘，这是成功染料加载所需的。 后者需要使用一对蠕动泵同时轻柔地将新一代VSD VF2.1（OMe）.H流入神经节的两侧。 我们期望所描述的技术广泛地转化为其他薄且相对透明的神经系统中的宽视场VSD成像。
【背景】双面显微镜是一种宽视野荧光成像系统，由一对精确对准的显微镜组成，用于观察来自对面的神经元制剂并且一次显示不同的焦平面（Tomina and Wagenaar，2017）。通过将该光学系统与新一代电压敏感染料（VSD），VoltageFluor（Miller等人，2012; Woodford等人，2015），荧光可以同时从不同深度的神经元捕获编码具有高保真度膜电压的信号。我们将这种泛神经元记录系统应用于药用水蛭的神经系统，我们利用电生理学方法诱发虚构行为并定量控制可识别神经元的膜电位（Tomina and ...
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| Ciberial Muscle 9 (CM9) Electrophysiological Recordings in Adult Drosophila melanogaster
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] The complexity surrounding presynaptic recordings in mammals is a significant barrier to the study of presynaptic mechanisms during neurotransmission in the mammalian central nervous system (CNS). Here we describe an adult fly neuromuscular junction (NMJ), the ciberial muscle 9 (CM9) NMJ, which allows for the recording of both evoked (EPSPs) and spontaneous postsynaptic excitatory potentials (mEPSPs) at a mature glutamatergic synapse. Combined with CM9-specific genetic technologies, the CM9 NMJ provides a powerful experimental system to better understand the regulation of neurotransmitter ...
[摘要] 围绕哺乳动物突触前记录的复杂性是哺乳动物中枢神经系统（CNS）神经传递过程中突触前机制研究的重要障碍。 在这里，我们描述成人飞行神经肌肉接头（NMJ），西伯利亚肌肉9（CM9）NMJ，其允许记录诱发（EPSP）和自发性突触后兴奋性潜力（mEPSPs）在成熟的谷氨酸能突触。 结合CM9特异性遗传技术，CM9 NMJ提供了一个强大的实验系统，以更好地了解成熟突触神经递质释放的调节。
【背景】在老化过程中定义突触前功能变化的重要障碍是由于缺乏一个简单的模型系统，用于执行必要的电生理记录，以彻底地表征神经递质从突触前神经末梢的释放。现有的啮齿动物模型遭受与衰老研究相关的显着成本问题和在具有一致释放参数的单个定义的神经末梢上使用电生理记录的技术难度。为了克服这些障碍，我们在成年果蝇中开创了一种模型突触系统，用于分析年龄对神经传递过程中突触前功能的影响，CM9 NMJ位于飞翔的长鼻（Rawson等） ，2012; Mahoney等人，2014; Mahoney等人，2016）（图4A）。简而言之，CM9运动神经元（MN）的突触前心轴收敛于CM9肌肉的15个肌肉纤维，以形成35个独立的神经支配（Rawson等人，2012）。已显示CM9 MN对于CM9肌肉的收缩是必需的，并且是CM9肌肉的谷氨酸能输入的唯一来源（Kimura等人，1986; ...
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