| A Co-culture Model for Determining the Target Specificity of the de novo Generated Retinal Ganglion Cells
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] In glaucoma, the output neurons of the retina, the retinal ganglion cells (RGCs), progressively degenerate, leading to irreversible blindness (Ahram et al., 2015). The ex vivo stem cell method to replace degenerated RGCs remains a potentially viable approach (Levin et al., 2004). However, the success of the approach depends upon the ability of the de novo generated RGCs to connect over the long distance with specific targets in the central visual pathway. Here, we describe a protocol to examine the target specificity of the de novo generated RGCs ...
[摘要] 在青光眼中，视网膜的输出神经元，视网膜神经节细胞（RGC）逐渐退化，导致不可逆的失明（Ahram等人，2015）。 替代退化RGCs的离体干细胞方法仍然是潜在可行的方法（Levin等人，2004）。 然而，该方法的成功取决于生成RGC的远程连接与中心视觉通路中特定目标的能力。 在这里，我们描述了一种协议，用于使用共培养方法来检查产生RG的产生RGCs的靶特异性，其中RGCs神经突被允许在特异性（上丘（SC））和非特异性 （下丘，IC）构造目标。
青光眼是全球不可逆失明的最常见原因之一（Tham等人，2014）。其特征在于RGC的进行性退化，视网膜的主要输出神经元，其与大脑连接用于视觉感知。不幸的是，目前尚无治疗RGCs变性的治疗方法。无论是外科手术，药理学还是神经保护，管理方法都不能扭转退行性变化（Danesh-Meyer，2011）。鉴于这种棘手的情况，干细胞治疗已经成为替代死亡RGCs的潜在可行方法。这种方法的成功需要：1）功能性和非致瘤性RGC与多能干细胞的定向分化，以及2）产生RGC的新生靶标特异性。我们的实验室最近展示了一种化学定义的方法，通过重述发育机制（Teotia等人，2016），允许RGCs从胚胎干（ES）/诱导的多能干细胞（iPS）细胞中的定向分化。所得的RGC是稳定的，功能性的和非致瘤性的。然而，远离干细胞在青光眼RGC变性中的生物细胞的成功取决于它们的轴突在中心视觉途径中找到适当靶标的能力。移植后，RGC的轴突必须在视网膜内导航，作为视神经退出，决定在视交叉处交叉或不交叉，并达到建立视网膜连接的具体目标。我们已经证明ES ...
|
|
|
| Analysis of Cancer Stromal Reaction Using an O-ring Co-culture Assay
|
|
Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] We have developed a 2D heterotypic co-culture technique between fibroblasts and cancer cells that enables the study of the stromal reaction. For such, stromal cells are seeded and cultured immediately around a tumour cell line, and the cells establish cell-cell contacts, as well as a gradient of soluble factors throughout the stromal cells, similar to that found in tissues. Thus, this system also enables the researcher to distinguish between events that are caused by direct cell-cell contact and secreted factors.
[摘要] 我们在成纤维细胞和癌细胞之间开发了二维异型共培养技术，可以研究基质反应。为此，将基质细胞接种并立即在肿瘤细胞系周围培养，并且细胞建立细胞 - 细胞接触以及遍及基质细胞的可溶性因子的梯度，类似于在组织中发现的。因此，该系统还使得研究者能够区分由直接的细胞 - 细胞接触和分泌因子引起的事件。
背景 组织内肿瘤的生长和存活取决于与周围基质细胞（如成纤维细胞，炎性细胞，内皮细胞和淋巴细胞）的相互作用。研究表明，随着肿瘤生长，癌细胞与周围成纤维细胞之间存在广泛的串扰。此外，肿瘤细胞可以将这些成纤维细胞激活成肿瘤相关成纤维细胞（TAF）。在某些情况下，这些成纤维细胞可能会限制肿瘤生长（Coulson-Thomas等人，2011和2013）;然而，在许多情况下，这些TAF帮助肿瘤细胞生长和存活（Coulson-Thomas等，2010和2015）。因此，体外癌症研究也应考虑到TAF对癌细胞的保护作用。考虑到这一点，我们在成纤维细胞和癌细胞之间开发了2D异型共培养技术，可以在同一系统中研究TAF和癌细胞。
|
|
|
| Primary Explosive Blast-induced Traumatic Brain Injury Model in PC12 Cell Culture
|
|
Author:
Date:
2016-08-20
[Abstract] While it is understood that structural damage occurs at the cellular level from the traumatic brain injury event, the effect on functional activity remains largely unknown. Simplified models such as in vitro models of primary explosive blast are critically needed to deconvolute mechanisms of cellular damage. This protocol details an in vitro indoor experimental system setup (Zander et al., 2015) using real military explosive charges to more accurately represent battlefield blast exposure, and probe the effects of primary explosive blast on dissociated neurons.
[摘要] 细胞毒性CD8 + T细胞能够通过其T细胞受体（TCR）与主要组织相容性复合物（MHC）分子呈递的小免疫原性肽（抗原）之间的特异性相互作用特异性识别和杀死靶细胞。抗原特异性细胞毒性T细胞的抗原识别能力和体外裂解活性可以在所谓的铬51（<51> Cr）释放测定中功能性评估，其是几乎50年前在我们的机构中发展起来的（Brunner等人，1968年）。放射性标记的内源性抗原呈递缺陷的细胞[例如，用于抗原呈递（TAP）缺陷型T2细胞的转运蛋白]，并用感兴趣的MHC稳定转染（例如 ，HLA-A2 sup + +）通常在这个4小时测定期间用作靶标。或者，内源性呈递免疫原性抗原的Cr标记的病毒感染或肿瘤细胞系可以作为靶细胞（例如，用于评估肿瘤识别）。 在肽滴定测定（部分A）中，用抗原性肽的系列稀释物对放射性标记的靶细胞进行脉冲，并在效应物（例如，CD8 + T细胞克隆）与靶细胞（ Cr-T2细胞）比（E:T）为10:1的混合物在96孔V型底板中37℃温育4小时。在肿瘤杀伤试验（B部分）中，将细胞毒性CD8 ...
|
|
|