| Cobblestone Area-forming Cell Assay of Mouse Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells (HSCs) require bone marrow microenvironment for their maintenance and proliferation. Culture of Bone Marrow Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) provides appropriate environmental signals for HSCs survival in vitro. Here, we provide a detailed protocol that describes culture conditions for MSCs, flow cytometric isolation of HSCs from mouse bone marrow, and perform co-culture of MSCs and HSCs known as Cobblestone area-forming cell (CAFC) assay. Altogether, CAFC assays can be used as a high-throughput in vitro screening model where efforts are ...
[摘要] 骨髓造血干细胞（HSC）需要骨髓微环境来维持和增殖。 骨髓间充质基质细胞（MSC）的培养为体外HSC存活提供适当的环境信号。 在这里，我们提供了描述MSCs培养条件的详细方案，从小鼠骨髓中流式细胞术分离HSCs，并进行称为鹅卵石区域形成细胞（CAFC）分析的MSC和HSC的共培养。 总而言之，CAFC分析可用作高通量体外筛选模型，其中努力了解和开发复杂骨髓疾病的治疗方法。 该方案需要培养MSC，分离LSK细胞（HSC）和执行有限稀释CAFC测定3至4周。
【背景】HSC的增殖，存活和分化潜力非常依赖于其微环境，也被称为小生境。骨髓MSC支持HSC以使其在骨髓龛中保持静止状态。由生态位接收的内在和外在信号有助于将HSC分化为也称为造血的成熟血细胞谱系，而不诱导异常扩增（Yoshihara等人，2007; Spindler等人 ，2014; Hu等人，2016）。鹅卵石区域形成细胞试验（CAFC试验）是长期骨髓HSC和MSC的体外共培养试验。当培养MSC在组织培养皿中完成融合时，将HSC铺在MSC上（de Haan和Ploemacher，2002）。 CAFC测定与骨髓的体内研究相当，并且可用作快速筛选测定以测试HSC的干细胞活性和MSC的支持活性（Ploemacher等人， ...
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| Primary Explosive Blast-induced Traumatic Brain Injury Model in PC12 Cell Culture
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Author:
Date:
2016-08-20
[Abstract] While it is understood that structural damage occurs at the cellular level from the traumatic brain injury event, the effect on functional activity remains largely unknown. Simplified models such as in vitro models of primary explosive blast are critically needed to deconvolute mechanisms of cellular damage. This protocol details an in vitro indoor experimental system setup (Zander et al., 2015) using real military explosive charges to more accurately represent battlefield blast exposure, and probe the effects of primary explosive blast on dissociated neurons.
[摘要] 细胞毒性CD8 + T细胞能够通过其T细胞受体（TCR）与主要组织相容性复合物（MHC）分子呈递的小免疫原性肽（抗原）之间的特异性相互作用特异性识别和杀死靶细胞。抗原特异性细胞毒性T细胞的抗原识别能力和体外裂解活性可以在所谓的铬51（<51> Cr）释放测定中功能性评估，其是几乎50年前在我们的机构中发展起来的（Brunner等人，1968年）。放射性标记的内源性抗原呈递缺陷的细胞[例如，用于抗原呈递（TAP）缺陷型T2细胞的转运蛋白]，并用感兴趣的MHC稳定转染（例如 ，HLA-A2 sup + +）通常在这个4小时测定期间用作靶标。或者，内源性呈递免疫原性抗原的Cr标记的病毒感染或肿瘤细胞系可以作为靶细胞（例如，用于评估肿瘤识别）。 在肽滴定测定（部分A）中，用抗原性肽的系列稀释物对放射性标记的靶细胞进行脉冲，并在效应物（例如，CD8 + T细胞克隆）与靶细胞（ Cr-T2细胞）比（E:T）为10:1的混合物在96孔V型底板中37℃温育4小时。在肿瘤杀伤试验（B部分）中，将细胞毒性CD8 ...
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