| In vitro Induction and Detection of Acrosomal Exocytosis in Human Spermatozoa
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The acrosome reaction is a highly regulated exocytotic event that primes spermatozoa for successful fertilization. Upon induction, acrosomal exocytosis proceeds via a wave of vesiculation that radiates across the sperm head, destabilizing the acrosomal vesicle and resulting in the release of the acrosomal contents. Having shed their acrosome, spermatozoa are then capable of penetrating the outer vestments of the oocyte and initiating fertilization. Accordingly, the failure of spermatozoa to complete an acrosome reaction represents a relatively common etiology in male infertility patients, and ...
[摘要] [摘要 ] 顶体反应是高度调控的胞吐事件，引发精子成功受精。诱导后，顶体胞吐作用通过一束囊泡波进行，该囊泡波辐射穿过精子头部，使顶体囊泡不稳定并导致顶体内容物释放。脱去顶体后，精子便能够穿透卵母细胞的外衣并开始受精。因此，在男性不育患者中，精子不能完成顶体反应代表了相对普遍的病因，并且诱导顶体胞吐作用的能力已在评估精子受精能力中发现了临床用途。在这里，我们首先描述驱动人类精子获能的方案 在体外使用化学成分确定的培养基以引发细胞完成顶体胞吐作用。然后，我们描述了常规用于诱导结合了生理激动剂（即甾体激素，孕酮）或药理试剂（即二价阳离子离子载体，A23187）的顶体胞吐作用的方法。最后，我们描述了组织化学和免疫荧光技术的应用，这些技术可用于研究顶体反应的完成。这样的协议对于临床和男科学研究实验室中的精子功能测试具有重要的诊断实用性。
[背景 ] 顶配体是雄性配子所特有的，是一种溶酶体样的膜细胞器，装饰在精子头部的前部区域，并由顶体内膜和外膜描绘（Hermo 等人，2010a和2010b）。如此形成的顶体囊泡封装了无数的结构和酶促组分，将其分隔为可溶或不可溶级分（Guyonnet 等，2012； Guyonnet 等，2014）。这些中的后者，称为顶体基质，用作稳定的支架，其允许在顶体反应期间受控释放受精所必需的基质相关蛋白（Guyonnet ...
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| GUS Staining of Guard Cells to Identify Localised Guard Cell Gene Expression
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Determination of a gene expression in guard cells is essential for studying stomatal movements. GUS staining is one means of detecting the localization of a gene expression in guard cells. If a gene is specially expressed in guard cells, the whole cotyledons or rosette leaf can be used for GUS staining. However, if a gene is expressed in both mesophyll and guard cells, it is hard to exhibit a clear expression of the gene in guard cells by a GUS staining image from leaf. To gain a clear guard cell GUS image of small G protein ROP7, a gene expressed in both mesophyll and guard cells, ...
[摘要] 保卫细胞中基因表达的测定对于研究气孔运动至关重要。 GUS染色是检测保卫细胞中基因表达定位的一种手段。如果在保卫细胞中特异性表达基因，则可以将整个子叶或玫瑰花叶用于GUS染色。然而，如果在叶肉和保卫细胞中表达基因，则难以通过来自叶的GUS染色图像在保护细胞中表达该基因的清楚表达。为了获得清晰的保护细胞GUS图像的小G蛋白ROP7 ，一种在叶肉和保卫细胞中表达的基因，我们从3-4周龄的植物的叶片剥离表皮条。去除叶肉细胞后，将表皮条用于GUS染色。我们比较了来自表皮条或小G蛋白ROP7和/或RopGEF4的叶片的GUS染色图像，其是在保卫细胞中特异性表达的基因，并且发现提供了表皮条带的GUS染色显示在叶肉和保卫细胞中表达的基因的保卫细胞表达的良好方法。该方案适用于在拟南芥保卫细胞中表达的任何基因，或表皮条可以容易地从叶上剥离的其它植物。
【背景】气孔运动调节植物和环境之间的气体交换，因此，重要的是揭示气孔的开启或关闭的机制。确定基因的保卫细胞表达对于研究其在气孔运动中的作用至关重要。鉴定基因在保卫细胞中的表达有几种方法。一种方法是通过RT-PCR（Jeon等人，2008; Takimiya等人，2013）检查保卫细胞中基因的RNA表达。为此，需要分离叶肉和保卫细胞的原生质体。另一种方法是检查表达由基因天然启动子驱动的GUS的转基因植物的保卫细胞中的GUS ...
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