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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated protein 9) systems have emerged as a powerful tool for genome editing in many organisms. The wide use of CRISPR/Cas9 systems may be due to the fact that these systems contain a simple guide RNA (sgRNA) that is relatively easy to design and they are very versatile with the ability to simultaneously target multiple genes within a cell (Varshney et al., 2015). We have developed a CRISPR/Cas9 system to delete large genomic fragments (exceeding 30 kb) in Saccharomyces cerevisiae. One ...
[摘要] CRISPR / Cas9（集群定期间隔的短回文重复/ CRISPR相关蛋白9）系统已经成为许多生物体中基因组编辑的有力工具。 CRISPR / Cas9系统的广泛使用可能是由于这些系统包含相对容易设计的简单导向RNA（sgRNA），并且它们具有同时靶向细胞内多个基因的能力非常通用的事实（Varshney 等，，2015）。我们开发了一种CRISPR / Cas9系统来删除酿酒酵母中的大型基因组片段（超过30 kb）。该技术的一个应用是研究非必需基因的大规模缺失的影响，这可以了解染色体内基因簇在分子水平上的功能。在这个协议中，我们描述了在 S中大片段删除的一般程序。包括：如何设计CRISPR数组，以及如何构建Cas9-crRNA表达质粒，以及如何检测系统内引入的突变。细胞。
【背景】CRISPR / Cas9系统是一种快速，高效，低成本，多用途的基因组编辑方法，可应用于生物学，农业学和医学领域。迄今为止，已经有几个方案报告了如何在基因组内进行大规模的缺失。这些方法中的每一种都包含其独特的特征和优点。最近开发的用于切除大片染色体的CRISPR / Cas9系统具有优于其他方法（例如Latour系统）（Hirashima等人，2006）的优势。 CRISPR / ...
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