| NP-40 Fractionation and Nucleic Acid Extraction in Mammalian Cells
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] This technique allows for efficient, highly purified cytoplasmic and nuclear-associated compartment fractionation utilizing NP-40 detergent in mammalian cells. The nuclear membrane is not disturbed during the fractionation thus leaving all nuclear and perinuclear associated components in the nuclear fraction. This protocol has been modified from Sambrook and Russell (2001) in order to downscale the amount of cells needed. To determine the efficiency of fractionation, we recommend using qPCR to compare the subcellular compartments that have been purified with equivalent amount of control whole ...
[摘要] 该技术允许在哺乳动物细胞中利用NP-40洗涤剂进行高效，高度纯化的细胞质和核相关的分室分离。 在分离过程中核膜不受干扰，从而使核部分中的所有核和核周相关成分留下。 该协议已经从Sambrook和Russell（2001）修改，以便缩减所需的细胞数量。 为了确定分馏的效率，我们建议使用qPCR来比较已经用等量的对照全细胞提取物纯化的亚细胞室。
【背景】为了充分获得对细胞过程的理解，需要分离核和细胞质隔室。 有许多协议，甚至一些商业套件可用于帮助分离两个隔间。 然而，大多数需要高离心速度，产量差异甚至验证最终产品中的污染物量的方法也是很高的。 我们的协议在低速下使用小型台式离心机，以获得高纯度的细胞质提取物和核/核周组合相关隔室，以及数据分析，以验证污染物的百分比。 迄今为止，已经测试的细胞系是293T，HeLa和GHOST细胞系。 （Galvis，2014; Galvis等，，2014）。
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| Isolation of Cytosol, Microsome, Free Polysomes (FPs) and Membrane-bound Polysomes (MBPs) from Arabidopsis Seedlings
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The plant endomembrane system plays vital roles for synthesis, modification and secretion of proteins and lipids. From the classic view, only mRNAs encoding secreted proteins could be targeted to the endoplasmic reticulum (ER) for translation via a co-translational translocation manner, however, recently this model has been challenged by accumulative evidence that lots of cytosolic mRNAs could also associate with ER, and that some categories of small RNAs are enriched on ER. These results suggested unrevealed functions of ER beyond our current knowledge. The large scale identification of RNAs ...
[摘要] 植物内膜系统对蛋白质和脂质的合成，修饰和分泌起着至关重要的作用。 从经典观点来看，只有编码分泌蛋白质的mRNA才能通过协同翻译方式靶向内质网（ER）进行翻译，然而最近，这一模型已经被大量的细胞溶质mRNA也可能与 ER，并且一些类别的小RNA在ER上富集。 这些结果表明ER的功能超出了目前的知识。 在微粒体上大规模鉴定RNA和蛋白质对于显示ER功能至关重要，研究将由下一代测序技术提升。 该协议提供了从植物组织中分离细胞质，微粒体，游离多聚体（FP）和膜结合多聚体（MBP）的技术工作流程。 分离的级分适用于mRNA，小RNA和蛋白质的基因组广谱分析。
【背景】植物内膜系统对于细胞壁形成，脂质生物合成，蛋白质合成，修饰，折叠和贩运非常重要。根据共翻译易位模型，分泌蛋白N末端的信号肽由细胞溶质多核糖体合成，然后由ER上的信号识别粒子识别，其余蛋白质部分随后在ER上合成。根据该模型，只有编码分泌蛋白的mRNA可以被带到ER进行翻译（Peter和Johnson，1994）。然而，从哺乳动物和植物细胞ER（Lerner等人，2003; de ...
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