| Differential Fractionation of Erythrocytes Infected by Plasmodium berghei
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] The study of host/pathogen interactions at the cellular level during Plasmodium intra-erythrocytic cycle requires differential extraction techniques aiming to analyze the different compartments of the infected cell. Various protocols have been proposed in the literature to study specific compartments and/or membranes in the infected erythrocyte. The task remains delicate despite the use of enzymes or detergents theoretically capable of degrading specific membranes inside the infected cell.
The remit of this protocol is to propose a method to isolate the erythrocyte cytosol ...
[摘要] [摘要 ] 疟原虫内红细胞周期中细胞水平上宿主/病原体相互作用的研究需要采用差异提取技术来分析感染细胞的不同区室，文献中提出了各种方案来研究特定的区室和/或尽管理论上使用酶或去污剂能够降解被感染细胞内部的特定膜，但这项工作仍然很棘手。
该方案的任务是提出一种通过percoll 梯度从感染细胞的其他区室中分离出红细胞胞浆和鬼影的方法，此外，使用equinatoxin II 裂解红细胞膜的方法已经被证明是更有效的方法。有效的在红细胞裂解不管细胞感染状态，相比常用链球菌溶血素。该虫空泡（PV）的含量收集皂素后，恢复细胞膜和寄生虫胞液蛋白通过的Triton X-100裂解，裂解液由此获得的前通过分析W¯¯ 西部时代印迹以评估各种提取steps.This协议的准确度允许主机室的从寄生虫隔间（PV和寄生虫）的分离，从而导致出口到主机宿主蛋白质的潜力的研究，以及寄生虫蛋白质细胞。
[背景] 本文所介绍的协议是，我们最初发表在一个协议的一个改进的科学报告.The 该协议的最初的目标是执行的表征P. 疟原虫由寄生虫出口到它的主机cell.This蛋白允许的免疫荧光测定法的证实，证实了蛋白质的输出-以及被布雷菲德菌素A 阻断-以及在被感染的红细胞中输出时相互作用蛋白的分析（Gnangnon et al。，2019）。
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| Optogenetic Tuning of Ligand Binding to The Human T cell Receptor Using The opto-ligand-TCR System
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] T cells are one major cell type of the immune system that use their T cell antigen receptor (TCR) to bind and respond to foreign molecules derived from pathogens. The ligand-TCR interaction half-lives determine stimulation outcome. Until recently, scientists relied on mutating either the TCR or its ligands to investigate how varying TCR-ligand interaction durations impacted on T cell activation. Our newly created opto-ligand-TCR system allowed us to precisely and reversibly control ligand binding to the TCR by light illumination. This system uses phytochrome B (PhyB) tetramers as a ...
[摘要] [摘要] T细胞是免疫系统的一种主要细胞类型，利用其T细胞抗原受体（TCR）结合并响应源自病原体的外来分子。配体-TCR相互作用的半衰期决定了刺激的结果。直到最近，科学家还是依靠突变TCR或其配体来研究变化的TCR-配体相互作用持续时间如何影响T细胞活化。我们新创建的光配体-TCR系统使我们能够通过光照精确且可逆地控制配体与TCR的结合。该系统使用植物色素B（PhyB ）四聚体作为光调节的TCR配体。PHYB 可光转化的结合（ON）之间，并且通过分别为660nm和740nm的光照射，非结合性（OFF）构象。PhyB ON能够结合通过将PhyB 相互作用因子（PIF）融合到TCRβ链而产生的合成TCR 。将PhyB 切换为OFF构象会破坏这种相互作用。PhyB 四聚体与PIF-TCR 足够长的结合导致T细胞活化（通过钙内流测量）。在这里，我们描述了有关如何为我们的光配体-TCR系统生成四聚体配体，如何通过流式细胞仪测量配体-TCR结合以及如何通过钙内流量化T细胞活化的协议。
[背景 ] ...
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| Separation and Purification of Glycosaminoglycans (GAGs) from Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The nematode Caenorhabditis elegans is a popular model organism for studies of developmental biology, neurology, ageing and other fields of basic research. Because many developmental processes are regulated by glycosaminoglyans (GAGs) on cell surfaces and in the extracellular matrix, methods to isolate and analyze C. elegans GAGs are needed. Such methods have previously been optimized for other species such as mice and zebrafish. After modifying existing purification protocols, we could recently show that the nematodes also produce chondroitin sulfate, in addition to heparan ...
[摘要] 线虫秀丽隐杆线虫是研究发育生物学，神经学，衰老等基础研究领域的流行模型生物。 因为许多发育过程由细胞表面和细胞外基质中的糖胺聚糖（GAG）调节，分离和分析C的方法。 线虫需要GAG。 此类方法先前已针对其他物种如小鼠和斑马鱼进行了优化。 在修改现有的纯化方案后，我们最近可以显示除了硫酸乙酰肝素外，线虫也产生硫酸软骨素，因此挑战了仅通过C合成非硫酸软骨素的观点。线虫。 我们在这里介绍我们适用于C的协议。线虫。 由于净化策略涉及非硫酸化和硫酸化GAG的分离，所以对于其他可能有利的方法也是有用的。
【背景】糖胺聚糖（GAG）是重复二糖单元的直链多糖链，其通常被硫酸根取代。除了透明质酸，其是在质膜上合成而不被锚定到任何蛋白质的非硫酸化GAG，所有其他GAG都与核心蛋白共价连接，从而形成蛋白聚糖（PG）。在PG上发现的最常见的GAG是硫酸乙酰肝素（HS）和硫酸软骨素（CS）/硫酸皮肤素，含有N-乙酰基 - 葡糖胺和N，N-乙酰基 - 半乳糖胺，分别（张，2010）。在高尔基隔室的生物合成过程中，它们是非模板驱动的过程，它们经过多种修饰，包括将葡萄糖醛酸差向异构化成艾杜糖醛酸，并在不同位置硫酸化（Bulow和Hobert，2006; ...
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