| Estimation of Silica Cell Silicification Level in Grass Leaves Using in situ Charring Method
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Silica cells are specialized leaf epidermal cells in grasses with almost the whole cell volume filled with solid silica. In sorghum, silica deposition in silica cells takes place in young, elongating leaves around the mid-length of the leaf. We developed a protocol for estimating the level of silica cell silicification in Sorghum bicolor leaves using in situ charring method (Kumar et al., 2017a). Here, we provide greater details on our protocol and method of image analysis. Although we based our protocol on sorghum, this protocol can be extended for estimating ...
[摘要] 二氧化硅细胞是草中特化的叶表皮细胞，几乎全部细胞体积充满固体二氧化硅。 在高粱中，二氧化硅细胞中的二氧化硅沉积发生在叶子中部周围的年轻的伸长叶片中。 我们开发了使用原位炭化法（Kumar等人，2017a）在高粱叶中估计二氧化硅细胞硅化水平的方案，。 在这里，我们提供了更多关于我们的协议和图像分析方法的细节。 虽然我们根据我们的高粱协议，这个协议可以扩展到估计任何草种的硅藻细胞硅化水平。
【背景】二氧化硅沉积是草的中心。禾草以二氧化硅的形式沉积至其干重的10％。植物中二氧化硅沉积的主要部位是根内胚层细胞，花序苞片的背面表皮细胞和叶中的二氧化硅细胞（Kumar等人，2017b）。几乎整个二氧化硅电池体积都填充有固体无定形二氧化硅。二氧化硅细胞中的二氧化硅沉积是生理控制的，发生在幼叶的中间长度周围（Kumar等人，2017a），我们将其命名为leaf-2（图1）。二氧化硅细胞硅化也是几个小时内完成的一个快速过程（Kumar and ...
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| A High-throughput Assay for mRNA Silencing in Primary Cortical Neurons in vitro with Oligonucleotide Therapeutics
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Primary neurons represent an ideal cellular system for the identification of therapeutic oligonucleotides for the treatment of neurodegenerative diseases. However, due to the sensitive nature of primary cells, the transfection of small interfering RNAs (siRNA) using classical methods is laborious and often shows low efficiency. Recent progress in oligonucleotide chemistry has enabled the development of stabilized and hydrophobically modified small interfering RNAs (hsiRNAs). This new class of oligonucleotide therapeutics shows extremely efficient self-delivery properties and supports potent ...
[摘要] 原代神经元是鉴定用于治疗神经变性疾病的治疗性寡核苷酸的理想细胞系统。然而，由于原代细胞的敏感性，使用经典方法转染小干扰RNA（siRNA）是费力的，并且通常显示低效率。寡核苷酸化学的最新进展使得稳定和疏水修饰的小干扰RNA（hsiRNA）的发展成为可能。这种新型的寡核苷酸治疗剂显示出非常有效的自我传递性质，并且在体外和体内支持有效和持久的效果。我们开发了高通量的体外测定法来鉴定和测试原代神经元培养物中的hsiRNA。为了简单，快速，准确地量化数百个hsiRNA的mRNA沉默，我们使用QuantiGene 2.0定量基因表达测定法。这种高通量，96孔板测定法可以直接从样品裂解液中定量mRNA水平。在这里，我们描述了一种制备96孔板格式的小鼠原代皮质神经元的短期培养物用于寡核苷酸治疗剂的高通量测试的方法。该方法支持在短短两周内测试hsiRNA文库和鉴定潜在的治疗方法。我们详细介绍了从初级神经元准备到数据分析的高通量测定工作流程的方法。该方法可以帮助鉴定用于治疗各种神经疾病的寡核苷酸治疗剂。
【背景】寡核苷酸治疗剂代表了通过沉默突变蛋白的表达，可以靶向任何遗传定义的病症的新一类药物。具体地，siRNA是负载于RNA诱导的沉默复合体（RISC）中的双链寡核苷酸，并且可以在mRNA翻译之前使mRNA沉默。然而，未修饰的siRNA是不稳定的，并且不能在没有阳离子脂质制剂的帮助下进入细胞，其可能对原代细胞如神经元有毒性。在本协议中，我们使用自我递送，疏水修饰的siRNA（hsiRNA）进行mRNA沉默。最近在寡核苷酸化学方面的进展使得这些稳定的hsiRNA的设计促进了细胞内化，有效进入RISC以及有力击倒靶基因（Byrne等，2013; ...
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