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Date:
2017-08-20
[Abstract] Membrane damage is a hallmark of both biotic and abiotic stress responses. The membrane determines the ability of a cell to sustain altered environmental conditions and hence can be used as a biomarker to assess stress-induced cell damage or death. We present an easy, quick, cost-effective, staining and spectrophotometric method to assess membrane stability of plant cells. In this method, Evan’s blue, an azo dye, is used to assay for cell viability. More specifically, Evan’s blue dye can penetrate through ruptured or destabilized membranes and stain cells. Thus, when plant cells are subjected ...
[摘要] 膜损伤是生物和非生物胁迫反应的标志。膜决定细胞维持改变的环境条件的能力，因此可以用作生物标志物来评估应激诱导的细胞损伤或死亡。我们提出了一种简单，快速，经济有效的染色和分光光度法来评估植物细胞的膜稳定性。在这种方法中，Evan的蓝色偶氮染料被用于测定细胞活力。更具体地说，Evan的蓝色染料可以穿透破裂或不稳定的膜并染色细胞。因此，当植物细胞受到影响膜完整性的应激时，与不受应激的对照细胞相比，Evan蓝染料渗透的细胞数将增加。相比之下，能够保持膜完整性的活的健康细胞不会吸收Evan的蓝色染料。摄取Evan蓝色染料的细胞会积累蓝色原生质染料，这些染色的细胞可以在有或没有使用相机的明视野显微镜下进行定性记录。此外，染料可以从被Evan的蓝色染料染色的细胞中提取，并且可以通过分光光度法进行定量。使用这种分析，染色阳性染色细胞中染料的积累与细胞膜损伤的程度相关，因此在各种条件下用Evan蓝色染料染色的细胞数量可用作细胞应激的指标。
【背景】植物是暴露于各种紧张因素的固着生物。膜由脂质和糖蛋白组成，作为物理保护屏障。当细胞暴露于诸如热的应力时，细胞膜的流动性被改变。氧化应激会破坏细胞膜。与氧化应激相关的活性氧（ROS）可以作用于膜脂质以降低膜的稳定性。评估膜稳定性的一个已建立的方案，称为沙利文方法，量化了膜中电解质渗漏的程度（Sullivan和Ross，1979）。这种方法是耗时的，繁琐的，涉及几个步骤。另外，由于该方法通常需要将组织暴露于高温（初始电解质泄漏和在高温沸腾后的最终电解质泄漏），所以该方法不能用于评估暴露于应力的植物中对膜的瞬时损伤。我们调整了一种可靠的Evan蓝染色技术，被许多研究人员用于评估细胞死亡或膜损伤（Smith等，1982; ...
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