| Virucidal and Neutralizing Activity Tests for Antiviral Substances and Antibodies
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] In a narrow definition, virucidal activity represents the activity by which to interact with and physically disrupt viral particles. In a broad definition, it includes the activity by which to functionally inhibit (neutralize) viral infectivity without apparent morphological alterations of the viral particles. The viral infectivity can be measured in cell culture system by means of plaque assay, infectious focus assay, 50% tissue culture infectious dose (TCID50) assay, etc. Morphologically, disruption of viral particles can be demonstrated by negative staining electron ...
[摘要] 在狭义定义中，杀病毒活性表示与病毒颗粒相互作用和物理破坏的活性。 在一个广义的定义中，它包括了功能上抑制（中和）病毒感染性而没有病毒颗粒的明显形态改变的活性。 可以通过噬菌斑测定，感染性聚焦测定，50％组织培养感染剂量（TCID 50）测定，等等在细胞培养系统中测量病毒感染性。 形态学上，病毒颗粒的破坏可以通过病毒颗粒的负染色电子显微镜分析来证明。 在这篇文章中，我们描述了用广义定义评估杀病毒活性的方法。
【背景】病毒是细胞内寄生虫，它们劫持宿主细胞机制来复制它们自己的基因组。在病毒生命周期的最初阶段，感染性病毒颗粒附着（结合）到靶细胞表面上的称为病毒受体的特定宿主蛋白，然后病毒渗透（内化和/或融合）到细胞的细胞内区室宿主细胞，其中病毒生命周期的后续步骤继续产生后代病毒体（Scheel和Rice，2013）。
狭义定义中的杀病毒活性表示与病毒颗粒相互作用和物理破坏的活性。在一个广义的定义中，它包括与病毒感染性相互作用并在功能上抑制（中和）病毒感染性而没有病毒颗粒的明显形态改变的活性，如抗体介导的中和的情况。
最近我们报道了从蛇毒（Chen等，2017）获得的分泌型磷脂酶Aβ的异构体和来自蝎毒（El-Bitar ...
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| Time-of-addition and Temperature-shift Assays to Determine Particular Step(s) in the Viral Life Cycle that is Blocked by Antiviral Substance(s)
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Date:
2018-05-05
[Abstract] Viruses infect their host cells to produce progeny virus particles through the sequential steps of the viral life cycle, such as viral attachment, entry, penetration and post-entry events. This protocol describes time-of-addition and temperature-shift assays that are employed to explore which step(s) in the viral life cycle is blocked by an antiviral substance(s).
[摘要] 病毒通过病毒生命周期的连续步骤感染它们的宿主细胞以产生子代病毒颗粒，例如病毒附着，进入，穿透和进入后事件。 该协议描述了用于探索病毒生命周期中的哪个或哪些步骤被抗病毒物质阻断的添加时间（time-of-addition）和温度变化分析。
【背景】病毒是专门的细胞内寄生虫，它们劫持宿主细胞机制来复制它们自己的基因组。病毒的生命周期通过感染性病毒颗粒（病毒粒子）附着（结合）到宿主细胞表面并将其穿透（内化，融合）到细胞内区室中进行，其中病毒粒子脱壳（分解）发生，然后是病毒基因组转录/复制，病毒蛋白质合成和病毒体组装，最终导致感染细胞产生和释放子代病毒体（Scheel and Rice，2013）。
为了探索病毒生命周期的哪个或哪些步骤被抗病毒物质阻断，进行药物添加时间实验。简而言之，在病毒接种细胞的不同时间点将病毒和/或宿主细胞添加到病毒和/或宿主细胞中（Chen等人，2017）：（1）预处理在病毒接种前带有抗病毒物质的细胞检查该物质是否可以阻断病毒受体以抑制病毒与宿主细胞的附着或者是否可以诱导产生抗病毒宿主因子如干扰素。 （2）对病毒进行预处理，然后将处理过的病毒接种到细胞中，检查抗病毒物质的杀病毒活性或中和活性。 （3）病毒接种期间细胞和病毒的共同处理检查病毒进入步骤的抗病毒效果，包括杀病毒（中和）活性和阻断病毒附着和细胞渗透。 ...
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| In vivo Priming of T Cells with in vitro Pulsed Dendritic Cells: Popliteal Lymph Node Assay
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] One-way mixed lymphocyte reaction (MLR) is a classic tool to measure how T cells react to external stimuli. However, MLR is an in vitro reaction system, which shows different response intensity compared with in vivo trails sometimes due to the lack of cytokines, tissue matrix and other immune response associated factors. The following popliteal lymph node assay (PLNA) protocol is designed to test the T cells antigen-specific reaction in vivo by using ovalbumin (OVA) specific reacted transgenic mouse OT-1 and OT-2.
[摘要] 单向混合淋巴细胞反应（MLR）是测量T细胞如何与外部刺激反应的经典工具。 然而，MLR是体外反应系统，其与体内踪迹相比显示出不同的反应强度，有时由于缺乏细胞因子，组织基质和其他免疫应答相关因素。 设计了以下po淋巴结测定（PLNA）方案，通过使用卵白蛋白（OVA）特异性反应的转基因小鼠OT-1和OT-2，体内测试T细胞抗原特异性反应。
【背景】在移植中，自身免疫和感染研究中，单向混合淋巴细胞反应（MLR）是评估T细胞增殖在抗原存在细胞（APC）或其他外部刺激反应中是否增加或抑制的有用参数。 这是一个典型的功能测试，它展示了T细胞如何受到免疫抑制药物（Hou et al。，2015; Zhang et al。，2015），阴性细胞或外来体疫苗（Ma）的测试试剂的影响 et al。，2016; Cai et al。，2017）。
然而，由于体外免疫反应系统，该系统具有一定的限制。 体内免疫反应受生物微环境的影响，如细胞因子，趋化因子，激素分泌，组织基质等未知生物因子。
在这里，po淋巴结测定（PLNA）被设计为体内工具，通过使用卵白蛋白（OVA）抗原特异性反应系统来测试增加或减少的免疫应答（Bhatt等，2014; Cai et al。，2017）。
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