| Ubiquitin Proteasome Activity Measurement in Total Plant Extracts
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The fine-tuned balance of protein level, conformation and location within the cell is vital for the dynamic changes required for a cell to respond to a given stimulus. This requires the regulated turnover of damaged or short-lived proteins through the ubiquitin proteasome system (UPS). Thus, the protease activity of the proteasome is adjusted to meet the current demands of protein degradation via the UPS within the cell. We describe the adaptation of an intramolecular quenched fluorescence assay utilizing substrate-mimic peptides for the measurement of proteasome activity in total plant ...
[摘要] 细胞内的蛋白质水平，构象和位置的微调平衡对于细胞对给定刺激作出反应所需的动态变化是至关重要的。 这需要通过泛素蛋白酶体系统（UPS）调节受损或短寿命蛋白质的周转。 因此，调节蛋白酶体的蛋白酶活性以满足目前通过细胞内的UPS的蛋白质降解的需求。 我们描述了使用底物 - 模拟肽进行分子内淬灭荧光测定来测定总植物提取物中蛋白酶体活性的适应性。 肽底物含有侧向于剪切键的供体 - 猝灭剂对。 切割后，随后随时测量产物的去质子供体发射的增加，并用于计算相对蛋白酶体活性。
【背景】泛素蛋白酶体系统（UPS）是真核细胞中主要的蛋白质降解机制，因此，UPS对许多细胞过程的调节至关重要，包括信号传导，细胞周期，囊泡运输和免疫。用于营业额的蛋白质通过泛素的共价连接标记，然后被26S蛋白酶体降解。 26S蛋白酶体由两个亚颗粒组成，即20S核心蛋白酶（CP），其分隔蛋白酶活性位点和19S调节颗粒，其将适当的底物识别并转移到CP腔中进行分解。调节蛋白酶体活性以维持蛋白酶抑制以响应内部和外部条件的波动。我们最近显示，UPS涉及植物免疫的几个方面，一系列植物和动物病原体颠覆了UPS来增强其毒力（Üstünet al。，2013;üstünet al。，2014;ÜstünandBörnke，2015 ;Üstünet ...
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| Isolation of Rodent Brain Vessels
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The prevalence of neurodegenerative diseases is increasing worldwide. Cerebrovascular disorders and/or conditions known to affect brain vasculature, such as diabetes, are well-known risk factors for neurodegenerative diseases. Thus, the evaluation of the brain vasculature is of great importance to better understand the mechanisms underlying brain damage. We established a protocol for the isolation of brain vessels from rodents. This is a simple, non-enzymatic isolation protocol that allows us to perform comparative studies in different animal models of disease, helping understand the impact ...
[摘要] 全世界神经退行性疾病的发病率正在增加。 已知会影响脑血管系统的脑血管疾病和/或病症，如糖尿病，是神经变性疾病的众所周知的危险因素。 因此，脑血管系统的评估对于更好地了解脑损伤的机制是非常重要的。 我们建立了从啮齿动物分离脑血管的方案。 这是一个简单的非酶分离方案，允许我们在不同的疾病动物模型中进行比较研究，帮助了解几种病理状况对脑血管系统的影响以及这些改变如何易于发生神经退行性疾病。
【背景】大脑高度依赖于通过庞大的血管网络到达的氧气和营养物质的不断供应。主要由微血管内皮细胞组成的血脑屏障（BBB），其包括脑内微血管以及周围结构，包括周细胞，星形胶质细胞和基底膜（Saraiva等，2016; Librizzi等，2017），保证控制稳态环境，保持脑细胞的健康。因此，研究如何干扰脑血管系统完整性的某些病理学是非常重要的。事实上，临床，成像，流行病学和神经病理学研究的有力证据证实了过去二十年来，脑血管疾病的存在在阿尔茨海默病（AD）和其他与衰老有关的痴呆中具有关键作用（Chui et al。，2006; Schneider et al。，2007; Gorelick et al。，2011; Wharton et al。，2011; Yarchoan et al。，2012; Bennett et al。，2013; DeCarli，2013; Toledo et ...
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