Cobblestone Area-forming Cell Assay of Mouse Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells (HSCs) require bone marrow microenvironment for their maintenance and proliferation. Culture of Bone Marrow Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) provides appropriate environmental signals for HSCs survival in vitro. Here, we provide a detailed protocol that describes culture conditions for MSCs, flow cytometric isolation of HSCs from mouse bone marrow, and perform co-culture of MSCs and HSCs known as Cobblestone area-forming cell (CAFC) assay. Altogether, CAFC assays can be used as a high-throughput in vitro screening model where efforts are ...
[摘要] 骨髓造血干细胞(HSC)需要骨髓微环境来维持和增殖。 骨髓间充质基质细胞(MSC)的培养为体外HSC存活提供适当的环境信号。 在这里,我们提供了描述MSCs培养条件的详细方案,从小鼠骨髓中流式细胞术分离HSCs,并进行称为鹅卵石区域形成细胞(CAFC)分析的MSC和HSC的共培养。 总而言之,CAFC分析可用作高通量体外筛选模型,其中努力了解和开发复杂骨髓疾病的治疗方法。 该方案需要培养MSC,分离LSK细胞(HSC)和执行有限稀释CAFC测定3至4周。
【背景】HSC的增殖,存活和分化潜力非常依赖于其微环境,也被称为小生境。骨髓MSC支持HSC以使其在骨髓龛中保持静止状态。由生态位接收的内在和外在信号有助于将HSC分化为也称为造血的成熟血细胞谱系,而不诱导异常扩增(Yoshihara等人,2007; Spindler等人 ,2014; Hu等人,2016)。鹅卵石区域形成细胞试验(CAFC试验)是长期骨髓HSC和MSC的体外共培养试验。当培养MSC在组织培养皿中完成融合时,将HSC铺在MSC上(de Haan和Ploemacher,2002)。 CAFC测定与骨髓的体内研究相当,并且可用作快速筛选测定以测试HSC的干细胞活性和MSC的支持活性(Ploemacher等人, ...
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Isolation of Mouse Cardiac Neural Crest Cells and Their Differentiation into Smooth Muscle Cells
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Cardiac neural crest cells (CNCCs) originate at the dorsal edge of the neural tube between the otic pit and the caudal edge of the 3rd somite, and migrate into the pharyngeal arches and the heart. We have shown that fibronectin (Fn1) plays an important role in the development of the CNCC by regulating the differentiation of CNCCs into vascular smooth muscle cells around pharyngeal arch arteries (Wang and Astrof, 2016). This protocol describes the isolation of CNCCs from the neural tube and from the caudal pharyngeal arches, and the differentiation of neural crest-derived cells into ...
[摘要] 心脏神经嵴细胞(CNCC)起源于神经管的背部边缘,位于第3个体节的耳穴和尾缘之间,并迁移到咽弓和心脏。 我们已经表明,纤连蛋白(Fn1)通过调节CNCCs到咽弓动脉周围的血管平滑肌细胞的分化,在CNCC的发展中起重要作用(Wang and Astrof,2016)。 该方案描述了CNCC与神经管和尾尾弓的分离,以及神经嵴衍生细胞分化成平滑肌细胞。 该方案从(Newgreen和Murphy,2000; Pfaltzgraff等人,2012)改编。 【背景】以前发表的方案描述了从神经管分离神经嵴细胞。然而,在耳孔和第三体细胞之间的神经管区域中的神经嵴细胞包括有助于许多不同细胞类型的神经嵴细胞群体;例如,迷走神经嵴细胞也来自该区域。在该方案中,我们修改了用于分离心脏神经嵴细胞的常规方法。而不是使用神经管,我们在胚胎期(E)9.5(22-25个体节期)使用尾部咽部弓形区。这是在将心脏神经嵴细胞分化为血管平滑肌细胞之前。神经嵴培养物通常含有污染性间充质细胞,通常表达平滑肌基因。为了鉴定神经嵴衍生细胞,我们从以下交叉产生的胚胎中分离出神经嵴细胞:Fn1flox / flox; ROSAmTmG / mTmG雌性小鼠×Fn1 +/-;Tfap2αIRESCre/ ...
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Explant Methodology for Analyzing Neuroblast Migration
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] The subventricular zone (SVZ) in the mammalian forebrain contains stem/progenitor cells that migrate through the rostral migratory stream (RMS) to the olfactory bulb throughout adulthood. SVZ-derived explant cultures provide a convenient method to assess factors regulating the intermediary stage of neural stem/progenitor cell migration. Here, we describe the isolation of SVZ-derived RMS explants from the neonatal mouse brain, and the conditions required to culture and evaluate their migration.
[摘要] 哺乳动物前脑中的室下区(SVZ)含有在整个成年期间通过流行性流(RMS)迁移到嗅球的茎/祖细胞。 SVZ衍生的外植体培养提供了一种方便的方法来评估调节神经干/祖细胞迁移的中间阶段的因素。在这里,我们描述了SVZ衍生的RMS外植体从新生儿小鼠脑中的分离以及培养和评估其迁移所需的条件。
背景 成年哺乳动物前脑含有一个位于啮齿动物和人类侧脑室旁边的神经源性小生境,并被恰当地命名为室下区(SVZ)。在啮齿动物中,SVZ是细胞的薄的“楔形”,覆盖了侧脑室的整个壁(Mirzadeh等人,2010; Paez-Gonzalez等人。 ,2014; Dixon等人,2016)。在SVZ内,慢分化的星形胶质细胞样B细胞分化成快速分裂的C型神经祖细胞(也称为转运扩增细胞),其产生双皮层蛋白阳性的A型神经母细胞,尽管少突胶质细胞和星形胶质细胞也能够(Garcia-Verdugo等人,1998; Tavazoie等人,2008; Rikani等人,2013)。在啮齿动物中,每天估计有10,000到30,000个神经母细胞。这些成神经细胞在通过流行流体流(RMS)迁移到嗅球时形成链(Lois和Alvarez-Buylla,1994; ...
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