| In vivo Tumor Growth and Spontaneous Metastasis Assays Using A549 Lung Cancer Cells
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] Metastasis accounts for the majority of cancer related deaths. The genetically engineered mouse (GEM) models and cell line-based subcutaneous and orthotopic mouse xenografts have been developed to study the metastatic process. By using lung cancer cell line A549 as an example, we present a modified protocol to establish the cell line-based xenograft. Our protocol ensures sufficient establishment of the mouse xenografts and allows us to monitor tumor growth and spontaneous metastasis. This protocol could be adapted to other types of established cancer cell lines or primary cancer cells to ...
[摘要] [摘要 ] 中号etastasis应收大多数癌症相关死亡。已经开发了基因工程小鼠（GEM）模型以及基于细胞系的皮下和原位小鼠异种移植物，以研究转移过程。以肺癌细胞系A549为例，我们提出了一种改进的方案来建立基于细胞系的异种移植物。我们的协议可确保小鼠异种移植物的充分建立，并允许我们监测肿瘤的生长和自发转移。该方案可适用于其他类型的已建立癌细胞系或原发性癌细胞，以研究转移过程的机制以及测试潜在抗癌药对肿瘤生长和转移能力的影响。
[背景 ] 的5年生存率速率为患者与晚期阶段肺癌症是少大于15％时，与在大多数的患者死于从转移性疾病（斯特和恩格尔曼，2012 ; 惠特塞特，等人，2013 ; D'安东尼奥等人。，2014 ; Steeg的，2016） 。因此，使用鼠标模型来调查的机制的肺肿瘤侵袭和转移可能促进了发展的新的战略来控制的转移过程。
转移是一个多步骤过程是包括本地侵袭，血管内，并且生存在的循环，外渗，一个d建立macrometastasis 在遥远的站点。小鼠异种移植和基因工程小鼠（GEM）模型均已用于研究肺癌转移。GEM模型模仿了人类肺癌的遗传标记，例如TP53 ，K- ras 和LKB1，为研究转移过程的机制以及研究新型抗癌剂如何影响转移过程提供了免疫系统（Dutt和Wong ，2006年）。 ； Zheng ...
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| Mandibular Explant Assay for Investigating Extrinsic Stimuli on Bone and Cartilage Development
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] A major issue in developmental biology is to determine how embryonic tissues respond to molecular signals in a timely manner and given the position-restricted instructions during morphogenesis, of which Meckel’s cartilage is a classical example. The ex-vivo explant model is a practical and convenient system that allows investigation of bone and cartilage responses to specific stimuli under a controlled manner that closely mimics the in vivo conditions. In this protocol, the explant model was applied to test whether Meckel’s cartilage and surrounding tissues are responsive to ...
[摘要] 发育生物学中的一个主要问题是确定胚胎组织如何及时响应分子信号，并且在形态发生期间给予位置限制指示，其中Meckel软骨是一个经典的例子。 体外外植体模型是一种实用且便利的系统，其允许以受控的方式调查对特定刺激的骨和软骨反应，所述方式严格模拟体内条件。 在这个协议中，外植模型被用来测试Meckel的软骨和周围组织是否对内皮素1（Edn1）信号分子有反应，以及是否会拯救基因突变的表型。 该系统允许在添加到外植体中的外源性化合物的浓度，关于测量下颌骨发育的时间点以及施用外源分子和致畸剂的方法方面进行高度的操作。
【背景】颅面畸形是人类最常见的先天性出生缺陷（Miettinen等人，1999）。许多这些畸形发生在面部形态发生期间，这是一个复杂的多步骤过程，其中颅神经嵴细胞迁移到咽弓以产生许多面部结构（Jin等人，2011）。
特定基因内的两种变异以及基因 - 基因相互作用都可能导致颅面变形。 IRF6基因突变导致头面部外胚层和上皮细胞的形成，导致唇裂，腭裂和下颌畸形。与 IRF6 相比， TWIST1 基因调节胚胎发育期间的神经管闭合和颅骨发育期间的颅缝融合。 TWIST1 ...
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| Labelling HaloTag Fusion Proteins with HaloTag Ligand in Living Cells
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Author:
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2017-09-05
[Abstract] HaloTag has been widely used to label proteins in vitro and in vivo (Los et al., 2008). In this protocol, we describe labelling HaloTag-Cbx fusion proteins by HaloTag ligands for live-cell single-molecule imaging (Zhen et al., 2016).
[摘要] HaloTag已广泛用于体外和体内标记蛋白质（Los et al。，2008）。 在本协议中，我们描述了通过HaloTag配体标记HaloTag-Cbx融合蛋白的活细胞单分子成像（Zhen等，2016）。
【背景】生物体的分子过程本质上是动态的。直接观察活细胞中的分子过程对于定量地了解生物系统的功能至关重要。荧光显微镜和荧光标记的最新进展使得能够可视化活细胞中单个单个分子的轨迹，提供有关动态相互作用和生物分子装配的见解（Kusumi等，2014; Liu等，2015; Tatavosian等， 2015; Cuvier和Fierz，2017）。用荧光团对生物分子进行特异性标记是荧光单分子成像的关键。 HaloTag是可以与活细胞中合成染料偶联的自标记标签蛋白（Los et al。，2008）。反应在活细胞中迅速发生，形成的共价键是特异性的和不可逆的。该技术已被用于研究体内遗传信息流，并测定活体哺乳动物细胞中基因调控的动力学（Liu et al。，2015; Zheng and Lavis，2017）。 Janelia FluorTM染料，如Janelia FluorTM ...
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