| Lentiviral shRNA Screen to Identify Epithelial Integrity Regulating Genes in MCF10A 3D Culture
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] MCF10A 3D culture system provides a reductionist model of glandular mammary epithelium which is widely used to study development of glandular architecture, the role of cell polarity and epithelial integrity in control of epithelial cell functions, and mechanisms of breast cancer. Here we describe how to use shRNA screening approach to identify critical cell pathways that couple epithelial structure to individual cell based responses such as cell cycle exit and apoptosis. These studies will help to interrogate genetic changes critical for early breast tumorigenesis. The protocol describes a ...
[摘要] MCF10A 3D文化系统提供了腺体乳腺上皮的还原剂模型，其广泛用于研究腺体结构的发育，细胞极性和上皮完整性在上皮细胞功能的控制中的作用以及乳腺癌的机制。在这里我们描述如何使用shRNA筛选方法来识别关键细胞通路，夫妇上皮结构到个别细胞的反应，如细胞周期退出和凋亡。这些研究将有助于询问对早期乳腺肿瘤发生至关重要的遗传变化。该协议描述了设计用于靶向上皮完整性的慢病毒shRNA构建体的文库和用于悬浮MCF10A培养物的慢病毒转导的高效方法。此外，提供的协议设置MCF10A 3D文化在Matrigel的形态和细胞反应研究通过结构化照明和共聚焦显微镜分析免疫染色的三维结构。
关键字： 3D文化，MCF10A，shRNA，上皮完整性，免疫荧光染色，3D成像，形态测量分析
[背景] 上皮细胞形成高度组织的组织结构，其提供物理支持和用于协调细胞信号传导的结构化支架。跨上皮结构的这种协调的信号传导对于上皮生物学是基本的;使得上皮细胞在调节器官大小，形状，功能和基于个体细胞的应答中的动态联合作用（Roignot等人，2013; Shamir和Ewald，2014）。上皮信号传导的联合指挥还提供了一种强有力的肿瘤抑制机制，通过将外部和内部有丝分裂信号门控到静止的上皮组织（Partanen等人，2013; Rejon等人 ...
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| Olfactory Bulb (OB) Transplants
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Author:
Date:
2016-09-05
[Abstract] Transplantation in mouse brain slices is a powerful tool in order to study axon targeting and migrational events during development. Taking advantage of donors and recipients belonging to different genotypes, this technique allows researchers to assess the contribution of donor and/or recipient tissue by performing various combinations and to study cell-autonomous functions or effects that are influenced by the recipient’s environment (Bastakis, et al., 2015). Here we describe the transplantation procedure on sagittal brain slices containing olfactory bulb (OB). Specifically, we have ...
[摘要] 小鼠脑切片中的移植是一个强大的工具，以便研究轴突靶向和发展过程中的迁移事件。 利用属于不同基因型的供体和受体，该技术允许研究人员通过进行各种组合来评估供体和/或受体组织的贡献，并研究受受体环境影响的细胞自主功能或效应（Bastakis， em>等人，2015）。 在这里我们描述的矢状大脑切片包含嗅球（OB）的移植程序。 具体来说，我们已经将背侧OB的近端到外皮部分移植到受体切片上的相同区域。 移植的切片可以培养长达3天，之后由于3D中的生长它们的形态被破坏。 这些切片的重新切片允许更详细的免疫组织化学分析。
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