|
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Superoxide dismutases (SODs) act as a primary defence against reactive oxygen species (ROS) by converting superoxide anion radicals (O2-) into molecular oxygen (O2) and hydrogen peroxide (H2O2). Members of this enzyme family include CuZnSODs, MnSODs, FeSODs, and NiSODs, depending on the nature of the cofactor that is required for proper activity. Most eukaryotes, including yeast, possess CuZnSOD and MnSOD. This protocol aims at assessing the activity of the yeast Saccharomyces cerevisiae MnSOD Sod2p from cellular extracts using ...
[摘要] [摘要 ] 超氧化物歧化酶（SOD能）充当主防御针对反应性氧物质（ROS）通过转换的超氧阴离子自由基（O 2 - ）为分子氧（O 2 ）和过氧化氢（H 2 ? 2 ）。这种酶的家庭成员包括CuZnSODs ，MnSODs ，FeSODs 和NiSODs ，这取决于是需要适当的活动辅助因子的性质。大多数真核生物，包括酵母，都具有CuZnSOD 和MnSOD 。该协议旨在评估酵母的活性 使用硝基蓝四唑染色法从细胞提取物中提取酿酒酵母MnSOD Sod2p 。该方法可用于估计Mn 2+ 的细胞生物利用度以及评估细胞的氧化还原状态。
[背景 ] 的SODs被定义为减少正常有氧代谢为氧气和过氧化氢期间形成的氧的有害自由基含金属的抗氧化剂酶。：这些酶是基于需要作为辅因子进行适当的酶活性的金属分类CuZnSODs ，MnSODs ，FeSODs ，和NiSODs 。在酿酒酵母中，有两个S OD ：CuZn-Sod1p和Mn-Sod2p（Abreu和Cabelli ...
|
|
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Human respiratory syncytial virus (RSV) infection in human lung epithelial A549 cells induces filopodia, cellular protrusions consisting of F-actin, that extend to neighboring uninfected cells (Mehedi et al., 2016). High-resolution imaging via stimulated emission depletion (STED) microscopy revealed filamentous RSV particles along these filopodia, suggesting that filopodia facilitate RSV cell-to-cell spread (Mehedi et al., 2016). In this protocol, we describe how to fix, permeabilize, immunostain, and mount RSV-infected A549 cells for STED imaging. We show that STED ...
[摘要] 人肺上皮A549细胞中的呼吸道合胞病毒（RSV）感染诱导丝状伪足，由F-肌动蛋白组成的细胞突起，延伸至相邻的未感染细胞（Mehedi等，2016）。 通过受激发射耗尽（STED）显微镜的高分辨率成像显示沿着这些丝状伪足的丝状RSV颗粒，表明丝状伪足有助于RSV细胞对细胞的扩散（Mehedi等，2016）。 在本协议中，我们描述如何修复，渗透，免疫染色和挂载RSV感染的A549细胞进行STED成像。 我们显示与共聚焦显微镜相比，STED增加了分辨率，可以通过使用去卷积软件的图像处理进一步改进。
【背景】RSV形成多形性病毒颗粒，其长度大约为直径约100nm，长度大约为10μm（Bachi和Howe，1973; Mehedi等，2016）。高分辨率光学显微技术是可视化RSV感染细胞和病毒颗粒之间相互作用的关键。在最近的一项研究中，我们使用超分辨率荧光显微镜来研究人肺上皮A549细胞中的RSV细胞对细胞的扩散。
STED显微镜是超分辨率显微镜技术之一，已被开发以规避约200nm衍射屏障的光限制（Hell和Wichmann，1994; Westphal等人，2008）。 ...
|