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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The transcription factor Hypoxia-Inducible Factor (HIF) complexes with the coactivator p300, activating the hypoxia response pathway and allowing tumors to grow. The CH1 and CAD domains of each respective protein form the interface between p300 and HIF. Small molecule compounds are in development that target and inhibit HIF/p300 complex formation, with the goal of reducing tumor growth. High resolution NMR spectroscopy is necessary to study ligand interaction with p300-CH1, and purifying high quantities of properly folded p300-CH1 is needed for pursuing structural and biophysical studies. ...
[摘要] 与共激活因子p300的转录因子缺氧诱导因子（HIF）复合物，激活缺氧反应途径并允许肿瘤生长。每个相应蛋白质的CH1和CAD结构域形成p300和HIF之间的界面。正在开发靶向和抑制HIF / p300复合物形成的小分子化合物，目的是减少肿瘤生长。研究配体与p300-CH1相互作用的高分辨NMR光谱是必要的，为了进行结构和生物物理学研究，需要净化大量正确折叠的p300-CH1。 p300-CH1具有3个锌指和9个半胱氨酸残基，构成与试剂相容性和蛋白氧化相关的挑战。已经开发了一种通过在表达过程中并入锌并简化纯化时间来克服这些问题的方案，导致适合于结构NMR研究的最佳折叠蛋白质（120mg / 4L表达介质）的高产率。已证实最终重组p300-CH1的结构完整性是使用一维1 H NMR光谱和圆二色性最优的。该方案适用于纯化其他含锌指蛋白质。
【背景】由于不适当的血管灌注，实体瘤的发展与缺氧区的发展有关。对于缺氧微环境，肿瘤细胞过表达低氧诱导因子（HIF），一种异二聚体转录因子家族（Semenza，2002; Brat和Van Meir，2004; Kaur等，2005）。 HIFs结合p300（一种转录共激活因子），形成诱导HIF靶基因的复合物，从而激活缺氧反应途径并促进肿瘤生长（Kasper and Brindle，2006; Liu，2008）。涉及HIF / p300蛋白 ...
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Author:
Date:
2015-10-20
[Abstract] A plethora of natural products, mostly secondary metabolites, are isolated and purified from many different organisms, like plants, fungi, algae, marine invertebrates, etc. The extraction procedure is specific to each organism, but some guidelines are usually followed for any purification procedure regarding targeted metabolites, such as alkaloids. Alkaloids are secondary metabolites that contain basic nitrogen in their structures and they are often associated with interesting biological properties especially in pharmacology field. This protocol describes the isolation procedure of ...
[摘要] 从许多不同的生物体如植物，真菌，藻类，海洋无脊椎动物等分离和纯化了大量天然产物，主要是次级代谢物。提取程序对每个生物体是特异性的，但是关于靶向代谢物（例如生物碱）的任何纯化程序通常遵循一些指导。生物碱是在其结构中含有碱性氮的次级代谢物，并且它们通常与有趣的生物学性质相关，特别是在药理学领域。该方案描述了直接从植物材料的乙醇提取物中的来自真鞭毛虫的吲哚生物碱的分离过程，产生不同的骨架类化合物，包括非碱性衍生物（水杨酸，胭脂碱，大线和β-咔啉）。该程序详述了使用光谱技术（NMR，MS，UV）从植物收集到分子水平表征新的或已知的分离的化合物的指南和步骤。我们详细描述了化合物纯化之后的萃取和分馏方法，以及它们的物理化学表征。该程序通过从大白菜Rauvolfia nukuhivensis的树皮中纯化大量吲哚生物碱的实例来说明。
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